可溶性淀粉合成酶(SSS）測(cè)定試劑盒 微量法

測(cè)定意義：SSS（EC 2.4.1.21）通常以游離態(tài)存在于質(zhì)體基質(zhì)中，催化淀粉鏈延長(zhǎng)，主要負(fù)責(zé)支鏈淀粉的合成。

測(cè)定原理：SSS催化ADPG與淀粉引物(葡聚糖)反應(yīng)，將葡萄糖分子轉(zhuǎn)移到淀粉引物上，同時(shí)生成ADP，在反應(yīng)體系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化NADP+還原為NADPH，NADPH生成量與前一步反應(yīng)中ADP生成量呈正比，340nm下測(cè)定NADPH增加量即可計(jì)算SSS活性。

需要的儀器，耗材:紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

可溶性淀粉合成酶(SSS）測(cè)定試劑盒 微量法

試劑一：液體×1 支，-20℃保存；臨用前加入 250μL 蒸餾水，充分溶解備用，用不完的試劑 4℃ 保存；試劑二：粉劑×1 支，-20℃保存；臨用前加入 250μL 蒸餾水，充分溶解備用，用不完的試劑 4℃ 保存；反應(yīng)液Ⅰ的配制：臨用前取液體一、粉劑一、粉劑二和粉劑三各一支，依次把粉劑一、粉劑二和粉劑三轉(zhuǎn)移到液體一中混合溶解。反應(yīng)液Ⅱ的配制：臨用前取液體二、粉劑四、粉劑五、粉劑六和粉劑七各一支，依次把粉劑四、粉劑五、粉劑六和粉劑七轉(zhuǎn)移到液體二中混合溶解。反應(yīng)液Ⅲ的配制：臨用前取液體三、粉劑八、粉劑九和粉劑十各一支，依次把粉劑八、粉劑九和粉劑十轉(zhuǎn)移到液體三中混合溶解。

一、粗酶液制備按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。二、測(cè)定步驟 1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng) 340nm，蒸餾水調(diào)零。 2、在 EP 管中按順序加入下列試劑試劑名稱(chēng)（μL） 測(cè)定管樣本 150 反應(yīng)液Ⅰ 270 混勻，30℃保溫 20 min，置沸水浴中 1 min（蓋緊，防止水分散失），冰浴冷卻反應(yīng)液Ⅱ 150 混勻，30℃保溫 30 min，置沸水浴中 1 min（蓋緊，防止水分散失），冰浴冷卻，10000g 25℃離心 10min，取上清液上清液 450 反應(yīng)液Ⅲ 300 試劑一 10 試劑二 10 混勻后立即在 340 nm 波長(zhǎng)下記錄初始吸光度 A1 和 2min 后的吸光度 A2，計(jì)算ΔA=A2-A1。注意：反應(yīng)液Ⅰ如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混勻。