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產(chǎn)品名稱:β-木糖苷酶測定試劑盒 微量法

產(chǎn)品型號:BC2625 2880

產(chǎn)品報(bào)價(jià):

產(chǎn)品特點(diǎn):β-木糖苷酶測定試劑盒 微量法
品牌:Solarbio | 貨號:BC2625
檢測方法 : 微量法
規(guī)格:100管/48樣

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BC2625 2880β-木糖苷酶測定試劑盒 微量法的詳細(xì)資料:

            β-木糖苷酶測定試劑盒 微量法

測定意義:β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、細(xì)菌和真菌等生物體,是催化木聚糖類半纖維素降解的關(guān)鍵酶,產(chǎn)物木糖可作為碳源應(yīng)用于微生物發(fā)酵。另外,β-木糖苷酶還可以作為生物漂白劑應(yīng)用于造紙工業(yè),比傳統(tǒng)的漂白法環(huán)保,具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。

測定原理:β-木糖苷酶催化對硝基苯酚-β-D-木糖苷產(chǎn)生對硝基苯酚,對硝基苯酚在405nm處有特征吸收峰,測定405nm光吸收增加速率,可計(jì)算β-木糖苷酶活性。

需要的儀器,耗材:天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。 

                β-木糖苷酶測定試劑盒 微量法

一、粗酶液提?。?1. 植物樣本:稱取約 0.1g 樣品,加 1mL 提取液充分冰浴勻漿,然后 12000rpm,4℃,離心 20min,棄沉淀 ,取 20μL 上清測定蛋白含量,剩余上清作為待測酶液。 2. 細(xì)菌、真菌樣本:收集約 500 萬個細(xì)胞,加入 1mL 提取液,超聲波破碎(冰浴,功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時間 3min);然后 10000rpm,4℃,離心 10min,棄沉淀 ,取 20μL 上清測定蛋白含量,剩余上清置于冰上待測。 3. 標(biāo)準(zhǔn)液的處理:用試劑二將標(biāo)準(zhǔn)液稀釋 0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0μmol/ml。二、測定操作表: 1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長 405nm,對照管調(diào)零。 2、操作表對照管 測定管 標(biāo)準(zhǔn)管酶液(μL) 40 40 40 試劑一(μL) 10 試劑二(μL) 80 70 80 混勻,45℃水浴 20min 試劑三(μL) 80 80 80 混勻,靜置 5min,對照管調(diào)零, 微量石英比色皿/96 孔板,測定 405nm 吸光值,記為 A405。

                   β-木糖苷酶測定試劑盒 微量法

β-木糖苷酶活性計(jì)算公式:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度(x)和濃度(y,μmol/ml)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,將△A帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,計(jì)算 樣品生成的產(chǎn)物量(μmol/ml)。 1、按蛋白含量計(jì)算酶活定義:45℃,pH7.4 時,每毫克蛋白質(zhì) 1min 內(nèi)催化產(chǎn)生 1 mol 對硝基苯酚的酶量為一個酶活單位。 β-木糖苷酶活性(μmol/min / mg prot)=(y×V 反總)÷(V 樣×Cpr)÷T=0.25×y÷Cpr 2、按樣本質(zhì)量計(jì)算:酶活定義:45℃,pH7.4 時,每克樣品 1min 內(nèi)催化產(chǎn)生 1 mol 對硝基苯酚的酶量為一個酶活單位。 β-木糖苷酶活性(μmol/min /g)=(y×V 反總)÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T=0.25×y ÷W 3. 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算:酶活定義:45℃,pH7.4 時,每 10 4個細(xì)胞 1min 內(nèi)催化產(chǎn)生 1 mol 對硝基苯酚的酶量為一個酶活單位。 β-木糖苷酶活性(μmol/min /10 4cell)= (y×V 反總)÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=0.0005×y Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;V 反總:反應(yīng)體系總體積,0.2mL;V 樣:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.04mL;V 樣總:加入提取液體積,1mL;W:樣本質(zhì)量,g; 500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù), 500 萬;T:反應(yīng)時間,20min。

 

 

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