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磷酸化蛋白提取試劑盒

磷酸化蛋白提取試劑盒用于哺乳動物組織和細胞中提取總蛋白，試劑盒中的裂解液含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑，作用較為強烈，可快速獲得總蛋白，可用于免疫印跡實驗等基礎研究實驗，由于含有上述的酶抑制劑，不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。本品僅用于科研。

產品組成:

 

操作方法:
1、組織總蛋白的提取
在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和PMSF；混勻，放置在冰上備用；
稱取0.1g的新鮮組織，放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處，用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎，然后加入0.5-1ml的新配置的裂解液，研磨直沒有明顯的組織塊，這個過程注意冰上操作；
將組織勻漿液移入1.5ml的EP管中，4 oC 12000g離心30min；
吸取上清新的管中；
進行蛋白定量或者變性進行蛋白實驗。
（提取好的蛋白建議保存于-80 oC，即用即取，避免反復凍融，避免長時間儲存。)
2、細胞總蛋白的提取
裂解液的用量：107個細胞需要裂解液1ml；
貼壁細胞：棄去培養(yǎng)基，用冷的PBS洗兩次，棄去PBS，然后加入計算好的細胞裂解液；在冰上用細胞刮刀進行刮離細胞，
將刮離的細胞裂解液移入EP管中，顛倒裂解20-30min
懸浮細胞：4 oC 400g離心收集細胞，用冷的PBS洗兩次細胞，同樣按細胞數(shù)加入裂解液，
渦旋10s，放置冰上裂解10min，重復3-4次；
裂解完畢之后，將細胞裂解液4 oC 12000g離心30min；
將上清移入新的EP管中；
進行蛋白定量或者變性進行蛋白實驗。
（提取好的蛋白建議保存于-80 oC，即用即取，避免反復凍融，避免長時間儲存。)

注意事項：
實驗過程，所有試劑都要需要預冷或者即融，保證操作過程中的低溫環(huán)境；
PSMF（有毒）現(xiàn)用現(xiàn)加，因為PMSF在水溶液中會快速降解；

相關文獻：
《Proanthocyanidins Protect against β-Hydroxybutyrate-Induced Oxidative Damage in Bovine Endometrial Cells》 作者:Xi Cheng,Shuhua Yang,Chuang Xu, Lanzhi Li,Yi Zhang, Yang Guo, Cai Zhang, Peng Li, Miao Long,Jianbin He 期刊:Molecules. 影響因子:3.098 PMID:30678309
《Luteoloside attenuates neuroinflammation in focal cerebral ischemia in rats via regulation of the PPARγ/Nrf2/NF-κB signaling pathway》 作者:Qiaoling Li,Zixia Tian,Minghui Wang,Jiejian Kou,Chunli Wang,Xuli Rong,Jing Li,Xinmei Xie,Xiaobin Pang 期刊:International Immunopharmacology 影響因子:3.361 PMID:30502652
《β?elemene inhibits oxygen?induced retinal neovascularization via promoting miR?27a and reducing VEGF expression》 作者:Weilai Zhang, Lei Chen ,Jin Geng, Limin Liu, Li Xu 期刊:Molecular Medicine Reports 影響因子:1.851 PMID:30664207