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產(chǎn)品名稱:大鼠外周血單核細(xì)胞分離液試劑盒

產(chǎn)品型號:P6700

產(chǎn)品報價:

產(chǎn)品特點(diǎn):大鼠外周血單核細(xì)胞分離液試劑盒
貨號:P6700
規(guī)格:2×200ml/KIT
保存 :室溫避光儲存,有效期少 2 年。

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P6700大鼠外周血單核細(xì)胞分離液試劑盒的詳細(xì)資料:

大鼠外周血單核細(xì)胞分離液試劑盒
貨號:P6700
規(guī)格:2×200ml/KIT
保存 :室溫避光儲存,有效期少 2 年。

大鼠外周血單核細(xì)胞分離液試劑盒

操作步驟:

1. 取新鮮抗凝全血(EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝血均可)或者去纖維蛋白血液,用等體積的全血及組織稀釋液或者PBS稀釋全血。

2. 取一支無菌離心管,先加入試劑A,再加入試劑D,使兩者形成梯度界面(試劑A:試劑D的體積比為3:2,如稀釋后的血液樣本小于5ml,則先后加入3ml試劑A和2ml試劑D;如稀釋后的血液樣本大于5ml,試劑總量與稀釋后的血液樣本量相等),兩種試劑的分層一定要清晰。

3. 將稀釋后的血液平鋪到分離液液面上方,注意保持兩液面界面清晰。(可以使用巴氏德吸管吸取血液,然后將血液小心的平鋪于分離液上,因?yàn)閮烧叩拿芏炔町?,將形成明顯的分層界面。如果樣品較多,加樣的時間較長,在離心之前出現(xiàn)紅細(xì)胞成團(tuán)下沉屬正常現(xiàn)象)

4. 室溫,水平轉(zhuǎn)子500~800g,離心20~30min(血液的體積越大所需的離心力越大,離心時間越長,分離條件需自行摸索,離心轉(zhuǎn)速不超過1000g)。

5. 離心后將出現(xiàn)明顯的分層: 層為血漿層;第二層為白色單核細(xì)胞層;第三層為透明試劑D液層;第四層為半透明試劑A液層;第五層為紅細(xì)胞層(如圖示)。

6. 小心吸取第二層試劑D層和第三層乳白色細(xì)胞層到另一無菌的15ml離心管中,加入10mL細(xì)胞洗滌液或PBS,顛倒混勻,250g,離心10min。

7. 棄上清,5mL的細(xì)胞清洗液或PBS重懸細(xì)胞,250g,離心10min。

8. 重復(fù)步驟7

9. 棄上清,細(xì)胞重懸備用。

10. 差異貼壁法純化細(xì)胞:用單核細(xì)胞培養(yǎng)基以10 6個/ml的密度重懸細(xì)胞,將細(xì)胞鋪于細(xì)胞板或細(xì)胞瓶中,置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行貼壁培養(yǎng)。

1) 2~4 h內(nèi)貼壁的為單核細(xì)胞。

2) 10~24 h內(nèi)貼壁的單個核細(xì)胞為內(nèi)皮、內(nèi)皮祖細(xì)胞、干細(xì)胞 。

3) 不貼壁的為淋巴細(xì)胞。根據(jù)不同細(xì)胞的貼壁時間存在差異,以達(dá)到簡單純化單核細(xì)胞的目的。此法成本低,操作簡便。如需獲得高純度的目的細(xì)胞則需選用免疫磁珠分選或者是應(yīng)用流式技術(shù)分選細(xì)胞。

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