產(chǎn)品內(nèi)容：

封閉液（5% BSA） 10ml

3% H2O2 10ml

Bio-兔抗山羊IgG濃縮液 100ul

SABC-POD濃縮液 100ul

稀釋液 30ml

20×DAB顯色液A 1ml

20×DAB顯色液B 1ml

保存： 如果長(zhǎng)時(shí)間不使用，請(qǐng)將所有試劑存放于-20℃，如經(jīng)常使用，可將封閉液，3% H2O2和20×DAB顯色液B存放于2-8℃以方便使用。

產(chǎn)品說(shuō)明：    本試劑盒適合于一抗為山羊IgG的免疫組化實(shí)驗(yàn)，DAB顯色。    SABC是專為免疫組化和其他免疫檢測(cè)而設(shè)計(jì)的，用以顯示組織和細(xì)胞中抗原分布。鏈霉親和素(StreptAvidin)是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質(zhì)，同親和素一樣，對(duì)生物素有極高的親和力，親和素是一個(gè)堿性蛋白質(zhì)（IP=10），經(jīng)改造后可以轉(zhuǎn)變成中性蛋白質(zhì)。鏈霉親和素等電點(diǎn)接近中性，對(duì)組織和細(xì)胞的非特異吸附很低，基于鏈霉親和素的免疫組化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex，SABC大約可形成一百個(gè)左右的過(guò)氧化物酶和五十個(gè)左右的鏈霉親和素所構(gòu)成的復(fù)合物。大量的酶將保證SABC具有很高的敏感性。

操作步驟:（以石蠟切片為例）1. 切片常規(guī)脫蠟至水(三次二甲苯，三次乙醇)。2. 3% H2O2室溫處理5-10分鐘以滅活內(nèi)源性酶。蒸餾水洗3次。3.可選步聚：

a、熱修復(fù)抗原，將切片浸入0.01M檸檬酸鈉緩沖液（PH6.0）,電爐或微波爐加熱至沸騰 后斷電，間隔5-10分鐘后，反復(fù)1-2次。冷卻后PBS（pH7.2-7.6）洗滌1-2次。

b、酶消化，滴加消化液，37℃10分鐘，PBS（pH7.2-7.4）洗滌2-3次。

c、跳過(guò)此步，直接進(jìn)入下一步。4. 滴加5% BSA封閉液,室溫20分鐘。甩去多余液體, 免洗。5. 用稀釋液將一抗按一定比例稀釋（稀釋后的一抗4℃可保存一周），也可另行購(gòu)買抗體稀釋液。滴加稀釋的一抗37℃孵育1小時(shí)左右或20℃ 2小時(shí)左右，也可4℃過(guò)夜。PBS（pH7.2-7.4）洗滌3次，每次2分鐘（一抗的稀釋度、孵育時(shí)間和溫度與染色強(qiáng)度、背景有直接關(guān)系。一般來(lái)說(shuō)，陽(yáng)性染色強(qiáng)度不夠時(shí)，可提高一抗?jié)舛群脱娱L(zhǎng)孵育時(shí)間；背景過(guò)高時(shí)，可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時(shí)間）。6. 根據(jù)用量，用稀釋液將Bio-兔抗山羊IgG濃縮液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10ul Bio-兔抗山羊IgG濃縮液混勻，此工作液4℃可保存一周)。滴加Bio-兔抗山羊IgG工作液,20-37℃ 孵育30分鐘。PBS（pH7.2-7.4）洗滌3次，每次2分鐘。7. 根據(jù)使用量，用稀釋液將SABC-POD濃縮液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10ul SABC-POD濃縮液混勻，此工作液4℃可保存一周)。滴加SABC-POD工作液,20-37℃，30分鐘。PBS （pH7.2-7.4）洗滌4次，每次5分鐘。8. DAB顯色:根據(jù)用量，用PBS（pH7.2-7.4）配制，按1ml PBS加入50ul 20×DAB顯色液A，加入50ul 20×DAB顯色液B 。充分混勻后滴加到切片上。室溫顯色，鏡下控制反應(yīng)時(shí)間，一般在5-30分鐘之間。蒸餾水洗滌終止反應(yīng)。9. 蘇木素輕度復(fù)染。脫水,透明,封片。顯微鏡觀察。    對(duì)于細(xì)胞爬片，固定后，PBS漂洗兩次，再用0.5% Triton X-100室溫孵育20分鐘，PBS漂洗兩次，3% H2O2處理15分鐘；PBS漂洗兩次，接上述第4步。    對(duì)于冰凍切片，固定后，PBS漂洗兩次，接上述第二步。

注意事項(xiàng)： 如果染色背景過(guò)高，在SABC反應(yīng)之后，DAB顯色之前,用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST（pH7.2-7.4）洗滌切片4次，PBS洗2次，然后DAB顯色。

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標(biāo)題:The effect and mechanism of dl-3-n-butylphthalide on angiogenesis in a rat model of chronic myocardial ischemia

成員:Yan-Bo Wang, Hu-Fang Yuan, Wei Zhi, Qing Wang, Guo-Zhen Hao, Yun-Fa Jiang

論文因子:3.94 發(fā)表期刊:American Journal of Translational Research pmid:35958466

注意：以上文獻(xiàn) 僅供參考

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