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產(chǎn)品名稱:基因工程產(chǎn)品 IPTG

產(chǎn)品型號:I8070

產(chǎn)品報價:

產(chǎn)品特點:基因工程產(chǎn)品 IPTG
貨號:I8070
規(guī)格:1g/5g/100g
分子式:C9H18O5S
分子量:238.31
儲存條件:2-8℃
純度:≥99.0%
外觀(性狀):白色結(jié)晶性粉末
單位:瓶

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I8070基因工程產(chǎn)品 IPTG的詳細資料:

基因工程產(chǎn)品 IPTG
貨號:I8070
規(guī)格:1g/5g/100g

  • 英文名稱:IPTG(Isopropyl β-D- Thiogalactopyranoside )
  • 別名:Isopropyl-β-D-Thiogalactoside;IPTG
  • CAS:367-93-1
  • 分子式:C9H18O5S
  • 分子量:238.31
  • 儲存條件:2-8℃
  • 純度:≥99.0%
  • 外觀(性狀):白色結(jié)晶性粉末
  • 單位:瓶

異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一種作用*的誘導(dǎo)劑,不被細菌代謝而十分穩(wěn)定,因此被實驗室廣泛應(yīng)用。當(dāng)有乳糖存在時,lac操縱子(元)即可被誘導(dǎo)。在這個操縱子(元)體系中,真正的誘導(dǎo)劑并非乳糖本身。乳糖進入細胞,經(jīng)b-半乳糖苷酶催化,轉(zhuǎn)變?yōu)榘肴樘?。后者作為一種誘導(dǎo)劑分子結(jié)合阻遏蛋白,使蛋白構(gòu)象變化,導(dǎo)致阻遏蛋白與O序列解離、發(fā)生轉(zhuǎn)錄。
實驗方案
1、外源基因的誘導(dǎo)表達
( 1 )用適當(dāng)?shù)南拗菩詢?nèi)切核酸酶消化載體DNA 和目的基因。
( 2 )按連接步驟連接目的基因和載體,并轉(zhuǎn)化到相應(yīng)的宿主菌。
( 3 )篩選出含重組子的轉(zhuǎn)化菌落,提取質(zhì)粒DNA 作限制性內(nèi)切核酸酶圖譜,DNA 序列測定確定無誤后進行下一步。
( 4 )如果表達載體的原核啟動子為PL 啟動子,則在30 -32 ℃ 培養(yǎng)數(shù)小時,使培養(yǎng)液的OD600達0.4-0.6 ,迅速使溫度升42 ℃ 繼續(xù)培養(yǎng)3 -5h ;如果表達載體的原核啟動子為tac 等,則37 ℃培養(yǎng)細菌數(shù)小時達到對數(shù)生長期后加IPTG 終濃度為1 mmol / L。繼續(xù)培養(yǎng)3 -5h 。
( 5 )取上述培養(yǎng)液1 mL , 1000g 離心,1 min ,沉淀,加100 μL 聚丙烯酰胺凝膠電泳上樣緩沖液后,作SDS -PAGE 檢測。
2、大腸桿菌包涵體的分離與蛋白質(zhì)純化
1 )細菌的裂解
常用方法有:① 高溫珠磨法;② 高壓勻漿;③ 超聲破碎法;④ 酶溶法;⑤ 化學(xué)滲透等。前三種方法屬機械破碎法,并且方法① 、② 已在工業(yè)生產(chǎn)中得到應(yīng)用,后三種方法在實驗室研究中應(yīng)用較為廣泛。下面介紹酶溶法和超聲破碎法的實驗步驟。
(1)酶溶法。常用的溶解酶有溶菌酶;β-1,3 -葡聚糖酶;β-1,6 -葡聚糖酶;蛋白酶;殼多糖酶;糖昔酶等。溶菌酶主要對細菌類有作用,而其他幾種酶對酵母作用顯著。
主要步驟為:
① 4 ℃ ,5000rpm 離心,15 min ,收集誘導(dǎo)表達的細菌培養(yǎng)液(100 mL )。棄上清,約每克濕菌加3 mL 裂解緩沖液,懸浮沉淀。
注意事項:培養(yǎng)噬菌體時,Top agar中的添加量為:25 μl/3 ml(24 mg/ml)。含有IPTG的培養(yǎng)基4℃避光保存,須在1~2 周內(nèi)使用。
保存:IPTG要2-8°C冷藏保存,配制好后保存于-20°C,室溫可放置一個月。遠離熱源及氧化劑。

    異丙基-β-D-硫代半乳糖苷,英文名稱IPTG。為安慰性誘導(dǎo)物,X-gal為生色底物,二者共同用于藍白斑篩選。IPTG可誘導(dǎo)載體lac操縱子DNA區(qū)段合成β-半乳糖苷酶氨基端片段,該片段可與宿主細胞編碼的缺陷型β-半乳糖苷酶實現(xiàn)基因內(nèi)互補(α互補)。實現(xiàn)α互補的細菌暴露IPTG,鋪在含有X-gal生色底物的培養(yǎng)基上,可形成藍色菌落。外源DNA插入質(zhì)粒的多克隆位點后可破壞α互補作用,將產(chǎn)生白色菌落。

特性:純度 :≥99.0% (TLC) 熔點:110-114℃

濕度(%):≤1.0 pH (5%, 水)25℃:5-7

比旋光度 (1%, 水):-34.0--29.0

溶解性:IPTG貯存液,先在8ml蒸餾水中溶解2g,定溶10ml,用0.22um濾器過濾除菌,貯存于-20℃。 

基因工程產(chǎn)品 IPTG

參考文獻:

《Engineering an electroactive Escherichia coli for the microbial electrosynthesis of succinate from glucose and CO2》 作者:Zaiqiang Wu,Junsong Wang, Jun Liu, Yan Wang, Changhao Bi, Xueli Zhang 期刊:Microbial Cell Factories 影響因子:4.402 PMID:30691454

《Engineering an electroactive Escherichia coli for the microbial electrosynthesis of succinate by increasing the intracellular FAD pool》 作者:Zaiqiang Wu,Junsong Wang,Xueli Zhang,Changhao Bi 期刊:Biochemical Engineering Journal 影響因子:3.371 PMID:

《Identification of the O-GalNAcylation site(s) on FOXA1 catalyzed by ppGalNAc-T2 enzyme in vitro》 作者:Siqi Zhang,Lijuan,Bai,Qiushi Chen,Yan Ren,Keren Zhang,Qiong Wu,Huang Huang,Wenli Li ,Yan Zhang,Jianing Zhang,Yubo Liu 期刊:Biochemical and Biophysical Research Communications 影響因子:2.705 PMID:31029427

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