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產(chǎn)品名稱:羥脯氨酸(HYP)含量檢測試劑盒

產(chǎn)品型號:BC0255

產(chǎn)品報價:

產(chǎn)品特點:羥脯氨酸(HYP)含量檢測試劑盒
測定意義:HYP是機體膠原蛋白主要成分之一,膠原蛋白大多分布于皮膚、腱、軟骨和血管等,因此HYP含量是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項重要指標。

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BC0255羥脯氨酸(HYP)含量檢測試劑盒的詳細資料:

羥脯氨酸(HYP)含量檢測試劑盒

產(chǎn)品名稱: 羥脯氨酸(HYP)含量檢測試劑盒

產(chǎn)品英文名: Hydroxyproline(HYP) Content Assay Kit

產(chǎn)品貨號:BC0250             產(chǎn)地:北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣          產(chǎn)品商標:solarbio
保存與運輸:4℃保存或-20℃保存;            參考價格:420
庫存狀態(tài):現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字: 羥脯氨酸檢測試劑盒|HYP檢測試劑盒|羥脯氨酸|試劑盒

簡要介紹:
HYP是機體膠原蛋白主要成分之一,膠原蛋白大多分布于皮膚、腱、軟骨和血管等,因此HYP含量是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項重要指標。
    樣品經(jīng)水解產(chǎn)生游離的HYP,進一補被氯胺T氧化,氧化產(chǎn)物與對二甲氨基ben甲醛反應,產(chǎn)生紅色化合物,在560nm處有特征吸收峰。通過測定樣品水解液560nm吸光值,可計算HYP含量。


產(chǎn)品詳細描述
產(chǎn)品內(nèi)容:
提取液:6mol/L鹽酸,自備。濃鹽酸:H2OV/V= 1:1,室溫保存。
試劑一:液體15mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體15mL×1瓶,4℃避光保存。
    標準品:液體1mL×1支,0.5mg/mL 羥脯氨酸標準品,4℃保存。
產(chǎn)品說明:
HYP是機體膠原蛋白主要成分之一,膠原蛋白大多分布于皮膚、腱、軟骨和血管等,因此HYP含量是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項重要指標。
樣品經(jīng)酸水解產(chǎn)生游離的HYP,進一步被氯胺T氧化,氧化產(chǎn)物與對二甲氨基ben甲醛反應,產(chǎn)生紅色化合物,在560nm處有特征吸收峰。通過測定樣品水解液560nm吸光值,可計算HYP含量。
試驗中所需的儀器和試劑:
天平、烘箱、玻璃管、離心機、水浴鍋、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿、6mol/L鹽酸和蒸餾水。
操作步驟:
一、羥脯氨酸提取
1. 組織:稱取約0.5g樣品于玻璃管,將組織盡量剪碎以便消化,蓋子稍松不密閉。加入5mL的提取液,煮沸或110℃烘箱26小時消化沒有可見大的團塊,16000rpm,25℃,離心20min(若離心后仍有雜質(zhì),可通過過濾去除),10mol/LNaOH(約3mL)調(diào)節(jié)pH值6~8范圍內(nèi)。蒸餾水定容8mL,取上清待測。(過程中可能有黑色物質(zhì)生成,若長時間不能消化,可能為碳化的物質(zhì))
2. 細胞:取500萬個細胞,加入1mL的提取液,煮沸或110℃烘箱26小時消化透明狀,16000rpm25℃,離心20min,用10mol/LNaOH(約0.5mL)調(diào)節(jié)pH值6~8范圍內(nèi)。蒸餾水定容2mL,取上清待測。
二、測定操作:

  1. 將標準品稀釋為15、7.5、3.75、1.8750.938、0.4690.234、0.117ug/mL的標準溶液。
  2. 按下表進行操作:

 

 對照管測定管標準管
樣本(μL 200 
標準溶液(μL  200
試劑一(μL200200200
混勻,室溫靜置20min
試劑二(μL200200200
H2OμL600400400
混勻,60℃,20min,取出后室溫靜置15 min,1mL比色皿,在560nm下分別測定對照管,測定管,標準管的OD值,并記為A對照管,A測定管,A標準管。


三、羥脯氨酸含量計算公式

  1. 標準曲線的繪制:

以標準溶液的濃度為x軸,?A標準(?A =A標準管-A對照管)為y軸,繪制標準曲線,得到方程y=kx+b。將?A測定?A =A測定管-A對照管)帶入方程得到x。

  1. 羥脯氨酸含量的測定:

1)按樣本鮮重計算:
組織羥脯氨酸含量(µg/g 鮮重)= x×V樣品÷W×V樣品÷V組提)=8x÷W
2)按樣本蛋白濃度計算:
組織羥脯氨酸含量(µg/mg prot= x×V樣品÷Cpr×V樣品)=x÷Cpr。
3)按細菌或細胞密度計算:
細胞羥脯氨酸含量(µg/104 cell= x×V樣品÷(細胞數(shù)量×V樣品÷V胞提)=2x÷細胞數(shù)量。
V樣品:加入的樣品體積,0.2mL;V組提:組織提取液體積,8mL;V胞提:細胞提取液體積,2mL;W:樣本鮮重;細胞數(shù)量:以104計;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL。
注意事項

  1. OD值大于1,樣品適當稀釋再測定,注意計算公式里乘以稀釋倍數(shù)。
  2. 試劑有一定的毒性,請操作時做好防護措施,防止吸入或與皮膚接觸。

     3、按樣本蛋白濃度計算時,需單獨提取樣本中的蛋白質(zhì)并測定。

 相關(guān)文獻:

《Enhancement of the chondrogenic differentiation of mesenchymal stem cells and cartilage repair by ghrelin》 作者:Litong Fan  Jiaqing Chen  Yanmeng Tao  Boon Chin Heng  Jiakuo Yu  Zheng Yang  Zigang Ge 期刊:Wiley Online Library 影響因子: PMID:30644571

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