West Pico ECL超敏發(fā)光液用于檢測(cè)直接或間接標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶HRP的抗體及其關(guān)聯(lián)的抗原。由于采用了獨(dú)特的發(fā)光底物系統(tǒng)，West Pico ECl超敏發(fā)光液是目前最靈敏的商業(yè)化熒光ECL檢測(cè)試劑：
(1) 可在日光燈下進(jìn)行發(fā)光操作;

產(chǎn)品說(shuō)明：

West Pico 超敏發(fā)光液用于檢測(cè)直接或間接標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶HRP的抗體及其關(guān)聯(lián)的抗原。用于HRP標(biāo)記抗體的Western Blot和HRP標(biāo)記探針的核酸雜交。由于采用了獨(dú)特的發(fā)光底物系統(tǒng)，West Pico超敏發(fā)光液是目前最靈敏的商業(yè)化熒光ECL檢測(cè)試劑：

具有極高靈敏度和高信噪比；可在日光燈下進(jìn)行發(fā)光操作；發(fā)光迅速，熒光可使X光膠片感光達(dá)12小時(shí)以上，特別適用于痕量蛋白或核酸檢測(cè)；可使用更高的抗體稀釋倍數(shù)(1:2000～1:10000)，極其節(jié)省抗體。

使用方法:

1. 執(zhí)行常規(guī)SDS-PAGE、轉(zhuǎn)膜和Western Blot步驟。注意用HRP標(biāo)記lgG或用一抗-鏈親和素-生物素-HRP夾法。

2. Western Blot最后一次洗膜的同時(shí)新鮮配制發(fā)光工作液：分別取等體積的溶液A和B，放入干凈容器中混合。建議立即使用工作液，室溫放置數(shù)小時(shí)后仍可使用但靈敏度略有降低。

3. 用鑷子取出膜，搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜完全干燥。將膜完全浸入發(fā)光工作液(0.125mL發(fā)光工作液/cm2膜)中，與發(fā)光工作液充分接觸。室溫孵育3分鐘，準(zhǔn)備立即壓片曝光。孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)不會(huì)增加靈敏度，有時(shí)還會(huì)導(dǎo)致曝光條帶異常。發(fā)光過(guò)程的本質(zhì)是酶促反應(yīng)，使用過(guò)少的發(fā)光工作液不利反應(yīng)進(jìn)行，也會(huì)導(dǎo)致膜上條帶曝光不均和明顯降低靈敏度。為達(dá)節(jié)約目的可將膜剪小但勿降低發(fā)光液用量。

4. 用鑷子夾起膜，搭在濾紙上瀝干發(fā)光工作液。但勿洗去發(fā)光液。

5. 打開(kāi)X光膠片暗盒，在暗盒內(nèi)表面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將Western Blot膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來(lái)完全包裹Western Blot膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。用膠帶將覆蓋Western Blot膜的保鮮膜固定在暗盒內(nèi)，蛋白帶面向上。

6. 暗房?jī)?nèi)壓X光膠片，分別曝光不同的時(shí)間如數(shù)秒到數(shù)分鐘。顯影沖洗。

注意事項(xiàng)：

1. 步驟1～5可在日光燈下操作;但發(fā)光液曝露于強(qiáng)光下時(shí)間過(guò)久靈敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。

2. 長(zhǎng)時(shí)間曝光或蛋白過(guò)量，將加深背景并使條帶強(qiáng)弱變化失去線性關(guān)系。曝光不足則條帶模糊。

3. 發(fā)光工作液孵育約3分鐘后膜上的條帶發(fā)光。強(qiáng)條帶發(fā)光在暗房中肉眼可見(jiàn)，低豐度蛋白條帶發(fā)光較弱甚至肉眼不可見(jiàn)但可使X光膠片曝光。不能簡(jiǎn)單以肉眼觀察判斷條帶發(fā)光時(shí)間。肉眼不可見(jiàn)的熒光實(shí)際上可持續(xù)數(shù)小時(shí)并使X光膠片感光，因而弱帶可曝光1-10小時(shí)。如果曝光后條帶不佳，可用洗膜緩沖液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL發(fā)光和曝光。

4. 由于超敏發(fā)光液極其靈敏，強(qiáng)烈推薦大多數(shù)進(jìn)口抗體起始濃度為一抗1:1000～1:4000，二抗1:2000～1:5000?？贵w濃度過(guò)高將造成高背景或沒(méi)有條帶，導(dǎo)致失敗。

5. 某些保鮮膜包裹印跡膜時(shí)可能會(huì)淬滅熒光，應(yīng)選擇高質(zhì)量保鮮膜。

6. 使用肉眼可見(jiàn)的預(yù)染色蛋白Marker和熒光-放射自顯影曝光標(biāo)簽可精確確定膠片上條帶的位置和大小。

7. NaN3能抑制HRP活性，回收第二抗體應(yīng)避免使用NaN3，如必需使用勿超過(guò)0.01%。

  備注：產(chǎn)品信息可能會(huì)有優(yōu)化升級(jí)。請(qǐng)以實(shí)際標(biāo)簽信息為準(zhǔn)。     

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標(biāo)題:Temporal changes in cyclinD-CDK4/CDK6 and cyclinE-CDK2 pathways: implications for the mechanism of deficient decidualization in an immune-based mouse model of unexplained recurrent spontaneous abortion

成員:Chang Zhuo, Kuang Hai-xue, Zhou Xueming, Zhu Hui, Zhang Yang, Fu Yin, Fu Qiang, Jiang Bei, Wang Wei, Jiang Sha, Ren Li, Ma Lei, Pan Xue, Feng Xiao-ling

論文因子:6.376 發(fā)表期刊:MOLECULAR MEDICINE pmid:36050637

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標(biāo)題:The feedback loop of EFTUD2/c-MYC impedes chemotherapeutic efficacy by enhancing EFTUD2 transcription and stabilizing c-MYC protein in colorectal cancer

成員:Zhu Xiaojian, Li Changxue, Gao Yunfei, Zhang Qingyuan, Wang Tao, Zhou Huaixiang, Bu Fanqin, Chen Jia, Mao Xinjun, He Yulong, Wu Kaiming, Li Ningning, Luo Hongliang

論文因子:11.3 發(fā)表期刊:JOURNAL OF EXPERIMENTAL & CLINICAL CANCER RESEARCH pmid:38163859

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標(biāo)題:Lentinan alleviates sciatic nerve injury by promoting autophagy to remove myelin fragments

成員:Haili Xiao, Chao Wei, Huiying Liu, Zhiqiang Li, Cihua Zheng, Jun Luo

論文因子:6.388 發(fā)表期刊:PHYTOTHERAPY RESEARCH pmid:37165703

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標(biāo)題:Fucoidan Attenuated Kidney and Bone Damage Caused by CKD-MBD in Mice by Upregulating Klotho

成員:Tao Lu, Mang Dou, Chengyi Yang, Qiangyan Hu, Yin’e Wang, Suxia Pan

論文因子:0.7 發(fā)表期刊:Pharmacognosy Magazine

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標(biāo)題:Inhibition of microRNA-17-5p reduces the inflammation and lipid accumulation, and up-regulates ATP-binding cassette transporterA1 in atherosclerosis

成員:Lili Tan,Limin Liu,Zhenyu Jiang,Xiaojiao Hao

論文因子:2.575 發(fā)表期刊:Journal of Pharmacological Sciences pmid:30850242

注意：以上文獻(xiàn) 僅供參考

WestPicoECL超敏發(fā)光液

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