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產品名稱:果膠酶活性檢測試劑盒

產品型號:BC2630

產品報價:

產品特點:果膠酶活性檢測試劑盒
果膠酶水解果膠生成半乳糖醛酸,半乳糖醛酸與 DNS 試劑反應生成在 540nm 有特征吸收峰的棕紅色物質,測定 540nm 處吸光值變化可計算得果膠酶活性。

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BC2630果膠酶活性檢測試劑盒的詳細資料:

果膠酶活性檢測試劑盒

果膠酶活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
英文名稱:Pectinase activity assay kit
關鍵詞:果膠酶|果膠酶活性檢測|果膠酶活性測定|果膠酶活性
注意:正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

貨號:BC2630
規(guī)格:50T/24S

產品內容:
提取液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 40mL×1 瓶,4℃保存。若溶液中有不溶解物質,可以 50℃水浴溶解。
試劑二:液體 40mL×1 瓶,4℃避光保存。
標準品:粉劑×1 支,10mg 半乳糖醛酸,4℃保存。臨用前加入 0.943mL 蒸餾水,配成 50µmol/mL的標準液。

產品說明:
果膠酶(pectinase)是分解果膠的酶類,包括原果膠酶,果膠酯酶,多聚半乳糖醛酸酶和果膠裂解酶四大類,廣泛存在于高等植物果實和微生物中,是水果加工中重要的酶。
果膠酶水解果膠生成半乳糖醛酸,半乳糖醛酸與 DNS 試劑反應生成在 540nm 有特征吸收峰的棕紅色物質,測定 540nm 處吸光值變化可計算得果膠酶活性。

試驗中所需的儀器和試劑:
可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、1mL 玻璃比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟:
一、粗酶液提取:
組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入1mL 提取液)進行冰浴勻漿,然后 10000g,4℃,離心 10min,取上清置于冰上待測。
菌類:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細胞加入 1mL 提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時間 3min);然后 10000g,4℃,離心 10min,取上清置于冰上待測。
液體:直接檢測。

二、測定步驟:
1、分光光度計預熱 30min 以上,調節(jié)波長 540nm,蒸餾水調零。
2、將 50µmol/mL 標準液用蒸餾水稀釋為 6、5、4、3、2、1 µmol/mL 的標準溶液備用。
3、取 125µL 樣本沸水浴 10min 備用。
4、操作表:(在 1.5mL 離心管中)
對照管 測定管 標準管 空白管
試劑一(µL)    500    500    500   500
50℃水浴溫育 5min
標準溶液(µL)   -      -       125    -
樣本(µL)       -     125       -     -
蒸餾水(µL)     -      -        -    125
煮沸樣本(µL)  125     -        -     -
混勻,50℃水浴反應 30min,馬上沸水浴 5min,冷卻后 8000g,常溫離心 10min,取上清。
上清液(µL) 500 500 500 500
試劑二(µL) 500 500 500 500
沸水浴 5min,冰浴冷卻終止反應,測定 540nm 處吸光值 A,計算△A=A 測定管-A 對照管,
△A 標準=A 標準管-A 空白管。每個測定管需設一個對照管。
三、果膠酶活性計算
1、 標準曲線的繪制:
以各個標準溶液的濃度為 x 軸,其對應的△A 標準為 y 軸,繪制標準曲線,得到標準方程 y=kx+b,
將△A 帶入方程得到 x(µmol/mL)
2、 果膠酶活性的計算:
(1)按蛋白濃度計算
酶活定義:在 50℃,pH3.5 條件下,每毫克蛋白每小時分解果膠產生 1µmol 半乳糖醛酸為 1 個
酶活力單位。
果膠酶活性(U/mg prot)=x×V 提取÷(V 提取×Cpr)÷T= 2x÷Cpr。
(2)按樣本質量計算
酶活定義:在 50℃,pH3.5 條件下,每克樣品每小時分解果膠產生 1µmol 半乳糖醛酸為 1 個酶
活力單位。
果膠酶活(U/g 鮮重)= x×V 提取÷W÷T=2x÷W。
(3)按照細胞數量計算
酶活定義:在 50℃,pH3.5 條件下,每 104 個細胞每小時分解果膠產生 1µmol 半乳糖醛酸為 1
個酶活力單位。
果膠酶活(U/104
cell)= x×V 提取÷T÷細胞數量(萬個)=2x÷細胞數量(萬個)。
(4)按液體體積計算
酶活定義:在 50℃,pH3.5 條件下,每 mL 樣本每小時分解果膠產生 1µmol 半乳糖醛酸為 1 個
酶活力單位。
果膠酶活(U/mL)= x×V 樣÷V 樣÷T= 2x。
V 提取:提取液體積,1mL; V 樣:加入的樣品體積,0.125mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;
W:樣本質量,g;T:反應時間:0.5h。
注意事項:
1、 A 大于 1.5 時,建議將樣品用提取液稀釋后再進行測定。
2、 植物果實組織建議將樣本稀釋 10 倍或 20 倍后再測定。

相關文獻:
《Transcription factor VmSeb1 is required for the growth, development, and virulence in Valsa mali》 作者:Yuxing Wu,Liangsheng Xu,Zhiyuan Yin,Hao Feng,Lili Huang 期刊:Microbial Pathogenesis 影響因子:2.332 PMID:29959044
《Two members of the velvet family, VmVeA and VmVelB, affect conidiation, virulence and pectinase expression in Valsa mali》 作者:Yuxing Wu , Liangsheng Xu , Zhiyuan Yin , Qingqing Dai , Xiaoning Gao,  Hao Feng , Ralf T. Voegele , Lili Huang 期刊:Molecular Plant Pathology 影響因子:4.379 PMID:29127722
 

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