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產品名稱:丙酮酸羧化酶(PC)檢測試劑盒

產品型號:BC0730

產品報價:

產品特點:丙酮酸羧化酶(PC)檢測試劑盒
測定意義:丙酮酸羧化酶(pyruvate carboxylase,PC,EC 6.4.1.1)廣泛存在于動物、霉菌和酵母的線粒體中,催化丙酮酸、ATP、CO2 和水生成草酰乙酸、ADP 和Pi,是糖異生過程的個限速酶,在保證血糖的動態(tài)平衡方面起著重要的作用。
測定原理:PC催化丙酮酸、ATP、CO2 和水生成草酰乙酸、ADP 和Pi,蘋果酸脫氫酶進一步催化草

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BC0730丙酮酸羧化酶(PC)檢測試劑盒的詳細資料:

丙酮酸羧化酶(PC)檢測試劑盒

操作步驟:

一、 樣本的前處理組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離: 1、 稱取約0.1g 組織或收集500 萬細菌或細胞,加入1mL 提取液,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。 2、 將勻漿600g,4℃離心5min。 3、 棄沉淀,將上清液移另一離心管中,11000g,4℃離心10min。 4、 上清液即胞漿提取物,可用于測定從線粒體泄漏的PC(此步可選做)。 5、 在步驟④的沉淀中加入1mL 提取液,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3秒,間隔10 秒,重復30 次),用于線粒體PC 活性測定。

二、測定步驟 1、 分光光度計預熱30min 以上,調節(jié)波長340nm,蒸餾水調零。

2、 工作液的配制:臨用前將試劑二和試劑三轉移到試劑一中混合溶解待用;置于37℃(哺乳動物) 或25℃(其它物種)預熱5 分鐘;用不完的試劑4℃保存一周;試劑四的配制:在試劑四瓶中加入2.5mL 蒸餾水充分溶解待用;用不完的試劑4℃保存一周;

3、 在1mL 石英比色皿中加入50μL 樣本、50μL 試劑四和900μL 工作液,立即混勻,記錄340nm 處初始吸光值A1 和 2min 后的吸光值A2,計算A=A1-A2。注意:在該試劑盒中,若ΔA 大于0.5,需將樣本用提取液稀釋適當倍數后測定,使ΔA 小于0.5 可提高檢測靈敏度。計算公式中乘以相應稀釋倍數。

丙酮酸羧化酶(PC)檢測試劑盒

PC 活性計算:(1) 按樣本蛋白濃度計算單位定義:每mg 組織蛋白每分鐘消耗1nmol NADH 定義為一個酶活力單位。 PC(U/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr (2) 按樣本鮮重計算單位定義:每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。 PC(U/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷(W ×V 樣÷V 樣總)÷T=1608×ΔA÷W (3) 按細菌或細胞密度計算:單位定義:每1 萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。 PC(U/10 4 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=3.215×ΔA V 反總:反應體系總體積,1×10 -3 L;ε:NADH 摩爾消光系數,6.22×10 3 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.05 mL;V 樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,2 min; Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;500:細菌或細胞總數,500 萬。

 

PC 活性計算:(1) 按樣本蛋白濃度計算單位定義:每mg 組織蛋白每分鐘消耗1nmol NADH 定義為一個酶活力單位。 PC(U/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr (2) 按樣本鮮重計算單位定義:每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。 PC(U/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷(W ×V 樣÷V 樣總)÷T=1608×ΔA÷W (3) 按細菌或細胞密度計算:單位定義:每1 萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。 PC(U/10 4 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=3.215×ΔA V 反總:反應體系總體積,1×10 -3 L;ε:NADH 摩爾消光系數,6.22×10 3 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.05 mL;V 樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,2 min; Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;500:細菌或細胞總數,500 萬。

相關文獻:

《Inhibition of?α?ketoglutarate dehydrogenase activity afects adventitious root growth in?poplar via?changes in?GABA shunt》 作者:Jianyun?Yue,Changjian?Du,Jing?Ji,Tiantian?Xie, Wei?Chen,Ermei?Chang, Lanzhen?Chen, Zeping?Jiang,Shengqing?Shi
 期刊:Planta 影響因子:3.06 PMID:
《lncRNA Ftx promotes aerobic glycolysis and tumor progression through the PPARγ pathway in hepatocellular carcinoma》 作者:Xiao Li, Qi Zhao, Jianni Qi, Wenwen Wang ,Di Zhang ,Zhen Li, Chengyong Qin 期刊:International Journal of Oncology 影響因子:3.571 PMID:29845188
 

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