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產(chǎn)品名稱:雙熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒 分子生物學(xué)

產(chǎn)品型號:D0010

產(chǎn)品報(bào)價(jià):

產(chǎn)品特點(diǎn):雙熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒 分子生物學(xué)
螢火蟲熒光素酶(Firefly luciferase)大小為61 KDa,單亞基蛋白,能夠催化熒光素(luciferin)氧化,生成氧化熒光素oxyluciferin;海腎熒光素酶(Renilla luciferase)為36 KDa的單亞基蛋白,能夠催化腔腸素(coelenterazine)氧化形成coelenteramide。二者在翻譯后均無需修飾即

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D0010雙熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒 分子生物學(xué)的詳細(xì)資料:

雙熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒 分子生物學(xué)

雙熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒( Dual-Lucy Assay Kit )
貨號:D0010
規(guī)格:100T
保存:低溫運(yùn)輸,冰袋運(yùn)輸。-20℃保存 12 個(gè)月。長期保存推薦 -80℃。
產(chǎn)品內(nèi)容:
組分編號 名稱 100 次 1000 次
A 細(xì)胞裂解液 60 mL 60 mL×10
B 螢火蟲熒光素酶緩沖液 10 mL 10 mL×10
C 螢火蟲熒光素酶底物(50 X) 200 µL 200 µL×10
D 海腎熒光素酶緩沖液 10 mL 10 mL×10
E 海腎熒光素酶底物(50 X) 200 µL 200 µL×10
注意:螢火蟲熒光素酶反應(yīng)工作液和海腎熒光素酶反應(yīng)工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。
產(chǎn)品說明:
螢火蟲熒光素酶(Firefly luciferase)大小為61 KDa,單亞基蛋白,能夠催化熒光素(luciferin)氧化,生成氧化熒光素oxyluciferin;海腎熒光素酶(Renilla luciferase)為36 KDa的單亞基蛋白,能夠催化腔腸素(coelenterazine)氧化形成coelenteramide。二者在翻譯后均無需修飾即可發(fā)揮作用。
Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒先以熒光素為底物來檢測螢火蟲熒光素酶報(bào)告基因的活性,之后在淬滅該熒光反應(yīng)的同時(shí),以腔腸素為底物檢測海腎熒光素酶報(bào)告基因的活性。其檢測機(jī)理機(jī)理如圖所示:

螢火蟲螢光素酶催化luciferin發(fā)光的發(fā)光波長為560 nm。海腎螢光素酶催化coelenterazine發(fā)光
的發(fā)光波長為465 nm。
通常將目的基因的5´UTR或者啟動子克隆Firefly Luciferase的上游,或者3´UTR克隆FireflyLuciferase的下游,通過檢測螢火蟲熒光素酶的量來檢測啟動子或者調(diào)控元件的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。RenillaLuciferase作為內(nèi)參,來消除細(xì)胞數(shù)量或者轉(zhuǎn)染效率的差異。

實(shí)驗(yàn)步驟
1:裂解細(xì)胞
1)將細(xì)胞裂解液充分混勻,按如下方式加入細(xì)胞裂解液,充分裂解細(xì)胞。
a: 對于貼壁細(xì)胞,吸盡細(xì)胞培養(yǎng)液,按照下表比例加入細(xì)胞裂解液,輕輕旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿或者培養(yǎng)板使裂解液*覆蓋細(xì)胞;
b: 對于懸浮細(xì)胞,離心棄去上清,按照下表比例加入裂解液,細(xì)胞培養(yǎng)板 96 孔板 48 孔板 24 孔板 12 孔板 6 孔板裂解液加入量 100 µL 150 µL 200 µL 300 µL 500 µL
2)冰上孵育 5 min,充分裂解細(xì)胞。
3)(選作)10000-16000rpm 離心 1 min,取上清。
2:熒光檢測
1)取20 µL 細(xì)胞裂解液,加黑色酶標(biāo)板中。按照實(shí)驗(yàn)需要,可設(shè)置 3 孔-5 孔重復(fù)。
2)配制螢火蟲熒光素酶反應(yīng)工作液和海腎熒光素酶反應(yīng)液,即螢火蟲熒光素酶底物(50 X)和海腎熒光素酶底物(50 X) 分別用對應(yīng)的緩沖液稀釋 1 X 工作液。并孵育室溫。
3)加入 100 µL 螢火蟲熒光素酶反應(yīng)液,震板混勻,檢測螢火蟲熒光素酶的活力,檢測盡量在 30 min 內(nèi)完成。
4)加入 100 µL 海腎熒光素酶反應(yīng)液,震板混勻,檢測海腎熒光素酶的活力,檢測盡量在 30 min 內(nèi)完成。
5)分析數(shù)據(jù)。

相關(guān)文獻(xiàn):

《Long non-coding RNA MBNL1-AS1 regulates proliferation, migration, and invasion of cancer stem cells in colon cancer by interacting with MYL9 via sponging microRNA-412-3p》 作者:Kongxi Zhu,Yunxia Wang,Lan Liu,Shuai Li,Weihua Yu 期刊:Clinics and Research in Hepatology and Gastroenterology 影響因子:2.807 PMID:31255531
《Effects of Srxn1 on growth and Notch signalling of astrocyte induced by hydrogen peroxide》 作者:Lan Li, Guangjun Lin, Huizi Gu, Lei Yu & Changwei Ni 期刊:Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology 影響因子:4.462 PMID:31079497
 

雙熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒 分子生物學(xué)

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