雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒 分子生物學(xué)

雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒( Dual-Lucy Assay Kit )
貨號(hào)：D0010
規(guī)格：100T
保存：低溫運(yùn)輸，冰袋運(yùn)輸。-20℃保存 12 個(gè)月。長期保存推薦 -80℃。
產(chǎn)品內(nèi)容：
組分編號(hào) 名稱 100 次 1000 次
A 細(xì)胞裂解液 60 mL 60 mL×10
B 螢火蟲熒光素酶緩沖液 10 mL 10 mL×10
C 螢火蟲熒光素酶底物（50 X） 200 µL 200 µL×10
D 海腎熒光素酶緩沖液 10 mL 10 mL×10
E 海腎熒光素酶底物（50 X） 200 µL 200 µL×10
注意：螢火蟲熒光素酶反應(yīng)工作液和海腎熒光素酶反應(yīng)工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。
產(chǎn)品說明：
螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase）大小為61 KDa，單亞基蛋白，能夠催化熒光素（luciferin）氧化，生成氧化熒光素oxyluciferin；海腎熒光素酶（Renilla luciferase）為36 KDa的單亞基蛋白，能夠催化腔腸素（coelenterazine）氧化形成coelenteramide。二者在翻譯后均無需修飾即可發(fā)揮作用。
Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒先以熒光素為底物來檢測(cè)螢火蟲熒光素酶報(bào)告基因的活性，之后在淬滅該熒光反應(yīng)的同時(shí)，以腔腸素為底物檢測(cè)海腎熒光素酶報(bào)告基因的活性。其檢測(cè)機(jī)理機(jī)理如圖所示：

螢火蟲螢光素酶催化luciferin發(fā)光的發(fā)光波長為560 nm。海腎螢光素酶催化coelenterazine發(fā)光
的發(fā)光波長為465 nm。
通常將目的基因的5´UTR或者啟動(dòng)子克隆Firefly Luciferase的上游，或者3´UTR克隆FireflyLuciferase的下游，通過檢測(cè)螢火蟲熒光素酶的量來檢測(cè)啟動(dòng)子或者調(diào)控元件的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。RenillaLuciferase作為內(nèi)參，來消除細(xì)胞數(shù)量或者轉(zhuǎn)染效率的差異。

實(shí)驗(yàn)步驟
1：裂解細(xì)胞
1）將細(xì)胞裂解液充分混勻，按如下方式加入細(xì)胞裂解液，充分裂解細(xì)胞。
a: 對(duì)于貼壁細(xì)胞，吸盡細(xì)胞培養(yǎng)液，按照下表比例加入細(xì)胞裂解液，輕輕旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿或者培養(yǎng)板使裂解液*覆蓋細(xì)胞；
b: 對(duì)于懸浮細(xì)胞，離心棄去上清，按照下表比例加入裂解液，細(xì)胞培養(yǎng)板 96 孔板 48 孔板 24 孔板 12 孔板 6 孔板裂解液加入量 100 µL 150 µL 200 µL 300 µL 500 µL
2）冰上孵育 5 min，充分裂解細(xì)胞。
3）（選作）10000-16000rpm 離心 1 min，取上清。
2：熒光檢測(cè)
1）取20 µL 細(xì)胞裂解液，加黑色酶標(biāo)板中。按照實(shí)驗(yàn)需要，可設(shè)置 3 孔-5 孔重復(fù)。
2）配制螢火蟲熒光素酶反應(yīng)工作液和海腎熒光素酶反應(yīng)液，即螢火蟲熒光素酶底物（50 X）和海腎熒光素酶底物（50 X） 分別用對(duì)應(yīng)的緩沖液稀釋 1 X 工作液。并孵育室溫。
3）加入 100 µL 螢火蟲熒光素酶反應(yīng)液，震板混勻，檢測(cè)螢火蟲熒光素酶的活力，檢測(cè)盡量在 30 min 內(nèi)完成。
4）加入 100 µL 海腎熒光素酶反應(yīng)液，震板混勻，檢測(cè)海腎熒光素酶的活力，檢測(cè)盡量在 30 min 內(nèi)完成。
5）分析數(shù)據(jù)。

相關(guān)文獻(xiàn)：

《Long non-coding RNA MBNL1-AS1 regulates proliferation, migration, and invasion of cancer stem cells in colon cancer by interacting with MYL9 via sponging microRNA-412-3p》 作者:Kongxi Zhu，Yunxia Wang，Lan Liu，Shuai Li，Weihua Yu 期刊:Clinics and Research in Hepatology and Gastroenterology 影響因子:2.807 PMID:31255531
《Effects of Srxn1 on growth and Notch signalling of astrocyte induced by hydrogen peroxide》 作者:Lan Li, Guangjun Lin, Huizi Gu, Lei Yu & Changwei Ni 期刊:Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology 影響因子:4.462 PMID:31079497
 

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