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產(chǎn)品名稱:Solarbio 鼠尾膠原蛋白I型

產(chǎn)品型號(hào):C5062

產(chǎn)品報(bào)價(jià):

產(chǎn)品特點(diǎn):鼠尾膠原是來(lái)源于鼠尾的一種天然的培養(yǎng)基,可以促進(jìn)體外培養(yǎng)細(xì)胞(尤其是上皮細(xì)胞)的貼壁;在制備細(xì)胞爬片時(shí),它也是一種天然的黏附劑,當(dāng)我們需要在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)放置小玻片,可在瓶底涂一層膠原,再放上小玻片,自然干燥后小玻片就能固定于培養(yǎng)瓶之中了。

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C5062Solarbio 鼠尾膠原蛋白I型的詳細(xì)資料:

索萊寶鼠尾膠原蛋白 I型(rattailtendon collagen type I)是通過(guò) Birkedal-Hansen的方法,通過(guò)醋酸抽提、氯

化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的。本公司鼠尾膠原蛋白可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿,培養(yǎng)一些在普通
細(xì)胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細(xì)胞。也可用于制備三維膠,模擬真實(shí)的生長(zhǎng)環(huán)境,使細(xì)胞在三維環(huán)境中生長(zhǎng)。
1,在使用索萊寶鼠膠原蛋白I型包被的細(xì)胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12細(xì)胞的貼壁和生長(zhǎng)。
2,在 1mg/ml 濃度以上,pH 為 7左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度的三維膠,檢查到 NIH-3T3 細(xì)胞在三維膠內(nèi)正
常生長(zhǎng)、PC-12細(xì)胞在三維膠表面正常生長(zhǎng)。
使??法 : 
1、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被 推薦濃度: 1-5ug/cm2
 
以包被濃度為 2 ug/cm2
 為例:用無(wú)菌0.006mol/L(0.36g/L) 乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/ml。
按以下表格體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中:

  表面積(cm2
 ,每孔或每皿)  加入 0.012mg/ml 膠原的體積( ul )
96孔細(xì)胞培養(yǎng)板       0.3     50
24孔細(xì)胞培養(yǎng)板       1.9     300
12孔細(xì)胞培養(yǎng)板       3.8     600
6孔細(xì)胞培養(yǎng)板         9.5     1580
35mm細(xì)胞培養(yǎng)皿      8       1330
60mm細(xì)胞培養(yǎng)皿      21     3500
100mm細(xì)胞培養(yǎng)皿    55      9170

確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面,開蓋在超凈臺(tái)上過(guò)ye晾干。 也可以在室溫放置 1小時(shí)后,用PBS洗3-4
次后直接使用。包被好的器皿在 4-25℃少可保存3個(gè)月以上的時(shí)間。
2、三維膠原的制備
鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上, pH 7左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。
膠原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中,在成膠過(guò)程中需要加入0.06×體積的 0.1mol/L NaOH 來(lái)中和。
需要的溶液 (均需要無(wú)菌、預(yù)冷): 10×PBS (可含10 mg/L的酚紅用于 pH 指示)或 10×培養(yǎng)液 , , 0.1mol/L
NaOH,0.1mol/L 乙酸(一般不用),雙蒸水
A. 不含細(xì)胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,1mg/ml三維膠為例):將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)
加到置于冰浴的離心管中,加入 690ul H2O。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中(如果反過(guò)來(lái)把12ul 0.1mol/L
NaOH 加到膠原溶液中,會(huì)由于NaOH 不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)), 立即混勻。再加入100ul 10×PBS

或10×培養(yǎng)液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,初次使
用時(shí)需要用pH 試紙測(cè)試)。將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果
配制中使用的是10×PBS,使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。
B.含細(xì)胞的三維膠原的制備(以配制 1 毫升,1mg/ml 三維膠為例):準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞,并放置
于冰浴中。將200ul鼠尾膠原蛋白I型 (5mg/ml)加到12ul 0.1mol/L NaOH中(如果反過(guò)來(lái)把12ul 0.1mol/L NaOH
加到膠原溶液中,會(huì)由于NaOH 不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻。再加入23ul 10×PBS或
10×培養(yǎng)液,混勻(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,初次使用時(shí)需要用pH 試紙測(cè)試)。
加入760ul的細(xì)胞懸浮液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后,加入
適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 
注意事項(xiàng) 注意事項(xiàng) 注意事項(xiàng) 注意事項(xiàng): :: :
鼠尾膠原蛋白I型在室溫下pH 中性時(shí)可迅速成膠,在操作過(guò)程中要盡量保持低溫。
 

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