細(xì)胞自噬染色檢測(cè)試劑盒(MDC法) solarbio

產(chǎn)品說(shuō)明：
自噬(autophagy)是細(xì)胞受到刺激后吞噬自身的細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞器，終將吞噬物在溶酶體內(nèi)降解的過(guò)程，自噬體(autophagosome)為雙層膜包被的圓形或橢圓形結(jié)構(gòu)，內(nèi)含細(xì)胞質(zhì)、長(zhǎng)壽蛋白質(zhì)和異常蛋白聚集物，損傷或多余細(xì)胞器如線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和微體、病毒和細(xì)菌等。單丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC )是一種熒光色素，是嗜酸性染色劑，通常被用于檢測(cè)自噬體形成的特異性標(biāo)記染色劑，其檢測(cè)激發(fā)濾光片波長(zhǎng) 355nm。阻斷濾光片波長(zhǎng) 512nm。細(xì)胞自噬染色檢測(cè)試劑盒(MDC 法)，適用于培養(yǎng)細(xì)胞的自噬染色，又稱為 MDC 染色液，可與EB 合用雙染。

自備材料：
熒光顯微鏡、低速離心機(jī)、EB 、載玻片、蓋玻片

操作步驟(僅供參考)：
(一)、MDC單獨(dú)染色：
1、 用去離子水稀釋10×Wash buffer1×。
2、 800g離心5min，收集細(xì)胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細(xì)胞1次，棄上清。
3、 加入適量的1×Wash buffer重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度106/ml。
4、 取適量90μl的細(xì)胞懸液新的EP管中，加入10μl的MDC Stain，輕輕混勻。
5、 室溫避光染色15～45min。
6、 800g離心5min，收集細(xì)胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細(xì)胞2次，棄上清。
7、 加入100μl的Collection buffer重懸細(xì)胞，滴加于載玻片上并加蓋玻片。
8、 熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)濾光片波長(zhǎng)355nm，阻斷濾光片波長(zhǎng)512nm)，計(jì)數(shù)并拍照。

注:貼壁細(xì)胞可以不消化，直接去除培養(yǎng)液，用1×Wash buffer清洗后進(jìn)行染色。MDC的量根據(jù)細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行調(diào)整。染色時(shí)間可適當(dāng)延長(zhǎng)根據(jù)染色結(jié)果進(jìn)行調(diào)整，染色結(jié)束后，用1×Wash buffer清洗觀察即可，不加Collection buffer。

(二)、與EB雙染色：
1、用去離子水稀釋10×Wash buffer1×。
2、800g離心5min，收集細(xì)胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細(xì)胞1次，棄上清。
3、加入適量的1×Wash buffer重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度106/ml。
4、取適量90μl的細(xì)胞懸液新的EP管中，分別加入10μl的MDC Stain和0.2μM EB染色液，輕輕混勻。
5、滴加于在玻片上，室溫避光染色15～30min，加蓋玻片。
6、熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)濾光片波長(zhǎng)512nm)，計(jì)數(shù)并拍照。

細(xì)胞自噬染色檢測(cè)試劑盒(MDC法) solarbio