細(xì)胞凋亡中, 染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量的粘性3'-OH末端，可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）的作用下，將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標(biāo)記到DNA的3'-末端，從而可進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測。由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3'-OH形成，很少能夠被染色。因此，Tunel成為了檢測DNA片段化（細(xì)胞凋亡）的常用方法。

Tunel檢測試劑盒（綠色熒光）可以通過一步反應(yīng)將熒光素標(biāo)記的dutp結(jié)合到3'-末端，使熒光素結(jié)合到DNA上，從而達(dá)到凋亡細(xì)胞的原位標(biāo)記。

Tunel檢測試劑盒（DAB顯色法）可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）的催化作用下，將3'-OH末端與與生物素（Biotin）-dUTP結(jié)合，然后通過親和素和生物素反應(yīng)，將HRP酶標(biāo)記到DNA的3'-末端，最后通過DAB顯色，進(jìn)行凋亡細(xì)胞標(biāo)記，在光學(xué)顯微鏡下可以直接觀察。

①安全性佳：工作液內(nèi)不含二甲申酸鈉等危化成分，配方簡單安全且操作簡單；

②特異性好：不易出現(xiàn)假陽性等情況，熒光陽性信號(hào)強(qiáng)；

③適用性廣：適用于凋亡細(xì)胞或石蠟組織切片檢測以及流式檢測等實(shí)驗(yàn)。

 

G4890

Tunel細(xì)胞凋亡檢測試劑盒（綠色熒光）
規(guī)格	價(jià)格
20T/50T	￥1640/3280

 

G4891

Tunel細(xì)胞凋亡檢測試劑（DAB顯色法）
規(guī)格	價(jià)格
20T/50T	￥1500/3000

 

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常見FAQS:

 

Q1: Tunel染色陽性信號(hào)弱？

 

可能原因

1. 組織或細(xì)胞通透不夠?qū)е潞罄m(xù)酶和熒光素?zé)o法進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記到DNA上；

2. 細(xì)胞或組織凋亡程度不夠，常規(guī)37℃反應(yīng)1h達(dá)不到預(yù)期；

3. 蛋白酶K修復(fù)后洗脫不充分，導(dǎo)致后續(xù)熒光標(biāo)記效果不佳；

4. 試劑失效或熒光素猝滅。

解決方案

1. 合理把控通透時(shí)間：對于細(xì)胞，適當(dāng)延長通透時(shí)間增加通透性；對于不同組織，選擇合適的蛋白酶K修復(fù)時(shí)間，一般3-4μm石蠟切片室溫修復(fù)10min即可；

2. 調(diào)整優(yōu)化細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)方案，在常規(guī)反應(yīng)時(shí)間上增加至2-3h；

3. 增加修復(fù)后洗滌次數(shù)和時(shí)間，確保蛋白酶K洗脫充分；

4. 選擇保質(zhì)期新鮮的試劑盒用于實(shí)驗(yàn)。

 

 

Q2: Tunel染色全陽性？

 

可能原因

1. 曝光時(shí)間過長導(dǎo)致大面積陽性信號(hào)；

2. 樣本處理方法不對，陽性對照DNase處理過度；

3. 某些組織凋亡程度高，常規(guī)37℃反應(yīng)1h反應(yīng)過度。

解決方案

1. 選擇合適的曝光時(shí)間；

2. 可以調(diào)整DNase的稀釋比例，增大稀釋比從而減少陽性率；

3. 選擇一個(gè)陽性對照切片，37℃反應(yīng)1h觀察陽性率。

 

 

Q3: Tunel染色結(jié)果背景和非特異性熒光強(qiáng)？

 

可能原因

1. 染色操作過程中出現(xiàn)干片現(xiàn)象導(dǎo)致背景熒光強(qiáng)；

2. 漂洗次數(shù)不足，未能洗脫背景熒光著色；

3. 血細(xì)胞、肌纖維等存在自發(fā)熒光，導(dǎo)致非特異著色；

4. 曝光時(shí)間長；

5. 工作液混勻不充分，探針未能均勻溶解，導(dǎo)致非特異性熒光雜點(diǎn)。

解決方案

1. 染色過程中，暫停操作時(shí)，建議滴加1×PBS保持樣本濕潤，同時(shí)用免疫組化筆圈下組織，減少液體流失；

2. 增加工作液孵育后漂洗次數(shù)和時(shí)間；

3. 制備切片前對組織進(jìn)行充分灌注或者采用自發(fā)熒光猝滅劑處理組織切片；

4. 提高分辨率，調(diào)節(jié)黑平衡或降低曝光時(shí)間。