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【生物小知識】胰蛋白酶消化細胞

【生物小知識】胰蛋白酶消化細胞

2015-08-17索萊寶生物

細胞外含有多種胞外蛋白,如膠原蛋白,這些蛋白使細胞間或細胞與培養(yǎng)瓶內(nèi)壁粘連起來。用胰蛋白酶分解這些蛋白質(zhì)后就可以使它們分開,這個過程叫做胰蛋白酶的消化作用。

貼壁細胞就是貼著細胞瓶底生長的細胞,細胞長滿瓶底后需要傳代,這個時候直接吹打細胞對細胞傷害很大,需要用胰蛋白酶對其消化,使細胞與瓶底貼合的沒那么牢固,這個時候就可以進行吹打使其從瓶底脫落下來。

胰蛋白酶有消化作用,處理動物組織后,可以使動物組織細胞間的膠原纖維和細胞外的其他成分酶解,獲得單個細胞。一般消化細胞用0.25%的胰酶,而且時間一定要掌握好,一邊消化,一邊在顯微鏡下觀察,注意不能消化過了反而對細胞自身造成損傷。除了胰蛋白酶外膠原蛋白酶也可以使用,因為這兩種蛋白酶的pH活性比較適中。

我公司的胰蛋白酶消化液種類全面,可以滿足大部分客戶需求。主推產(chǎn)品(T1300/T1320)胰蛋白酶-EDTA 消化液(含酚紅和不含酚紅)。

  • 產(chǎn)品說明 :

在組織細胞的體外培養(yǎng)和原代細胞培養(yǎng)中的組織細胞分散(將組織塊制備成單個細胞懸液)以及傳代細胞培養(yǎng)中,貼壁生長細胞的消化分散均要使用組織細胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶,EDTA 等,其功能主要是使細胞間的蛋白質(zhì)(如細胞外基質(zhì))水解,使組織或貼壁細胞分散成單個細胞,制成細胞懸液用于進一步的實驗。

索萊寶生產(chǎn)的胰蛋白酶-EDTA 消化液(Trypsin-EDTASolution)含0.25%胰酶和 0.02%EDTA(0.53mM),溶于無鈣鎂平衡鹽溶液中,經(jīng)過濾除菌,可以直接用于培養(yǎng)細胞和組織的消化。本產(chǎn)品具有方便快速、穩(wěn)定安全、細胞狀態(tài)好等特點。通常室溫消化2分鐘左右就可以消化大多數(shù)貼壁細胞。胰蛋白酶-EDTA消化液有含酚紅和不含酚紅2類產(chǎn)品,酚紅具有pH指示作用。

保存:-20℃保存,有效期 12 個月。

  • 使用方法 :

1. 貼壁細胞的消化:

a) 吸去培養(yǎng)液,用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。

b) 加入少量胰蛋白酶-EDTA 消化液,蓋過細胞即可,室溫放置 1-2 分鐘。不同的細胞消化時間有所不同,對于貼壁牢固的細胞可適當延長消化時間。

c) 顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化;或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來。此時吸除消化液。加入含血清的細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。

d) 如果發(fā)現(xiàn)消化不足,可加入胰蛋白酶-EDTA 消化液重新消化。

e) 如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落,直接用胰酶細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000-2000g 離心 1 分鐘,沉淀細胞,盡量去除胰酶細胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。

2. 組織的消化:

不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。

  • 注意事項 :

1.由于組織或細胞性質(zhì)不同,實驗人員應依據(jù)具體情況,確定佳消化時間;消化細胞時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁和生長狀況;

2.胰蛋白酶-EDTA消化液不含抑菌劑,在使用過程中要特別注意無菌操作,避免消化液被微生物污染;

3.胰蛋白酶-EDTA消化液,不宜4℃長期保存,切忌反復凍融,小量使用時建議分裝凍存;

4. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作

 

 

 

T1300 胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%)不含酚紅 solarbio 100ml

T1320 胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%)含酚紅 solarbio 100ml

T1350 胰蛋白酶消化液(0.25%)不含酚紅 solarbio 100ml


 

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