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【實驗天地】DNA提取實驗流程

【實驗天地】DNA提取實驗流程

2015-08-18 索萊寶生物

1實驗原理

細胞在變性劑的作用下被裂解,同時核蛋白體上的蛋白變性,核酸釋放;釋放出來的DNA和RNA由于在特定PH下溶解度的不同而分別位于整個體系中的水相和中間相,從而得以分離;有機溶劑抽提,沉淀,得到純凈DNA。

2試驗方法

 

材料準(zhǔn)備→破碎細胞,釋放內(nèi)容物→核酸分離、純化→核酸的沉淀或吸附及雜質(zhì)的去除→核酸溶解保存

1.試劑盒提取法

公司產(chǎn)品

D1500 植物基因組DNA提取試劑盒 solarbio 50T/100T 盒 400.00/700.00

D1600 細菌基因組DNA提取試劑盒 solarbio 50T/100T 盒 400.00/700.00

D1700 動物組織/細胞基因組DNA提取試劑盒 solarbio 50T/100T 盒400.00/700.00

D1800 全血基因組DNA提取試劑盒 solarbio 50T/100T 盒 400.00/700.00

D1850 全血基因組DNA提取試劑系統(tǒng) solarbio 50T/200T 盒 360.00/960.00

D1900 酵母基因組DNA提取試劑盒 solarbio 50T/100T 盒 400.00/700.00

D2100 通用基因組DNA提取試劑盒 solarbio 50T/100T 盒 400.00/700.00

D2300 真菌基因組DNA提取試劑盒 solarbio 50T/100T 盒 500.00/850.00

D2400 DNA病毒基因組提取試劑盒 solarbio 50T/100T 盒 400.00/700.00

D2600 土壤基因組DNA提取試劑盒 solarbio 50T/100T 盒 680.00/1200.00

D2700 糞便基因組DNA提取試劑盒 solarbio 50T/100T 盒 400.00/700.00

 

 

2.苯酚氯仿提取法

實驗步驟

① 裂解液(SDS/異硫氰酸胍)、RNAse、蛋白酶K等55~65℃裂解細胞,使蛋白變性,釋放核酸,加入KAc以提高鹽濃度,使蛋白質(zhì)、多糖等沉淀。

② 裂解*后加入一定體積的苯酚-氯仿,混勻后離心取上清;

③ 加入等體積氯仿-異戊醇,混勻后離心取上清水相;

④ 加入定量的異丙醇,使DNA沉淀,加入適量的核酸助沉劑或乙酸鈉以增加核酸的獲得率,離心除去上清;

⑤ 用70%的乙醇洗滌1~2次,加入適量氯化鈉或氯化鋰等去除多糖;(可用PEG代替乙醇,具有去多糖作用)

⑥ 待酒精揮發(fā)*后,用TE緩沖液溶解DNA,保存?zhèn)溆谩?/SPAN>

 

溫馨提示:本公司出售以上實驗中所用到的各種產(chǎn)品,有意者請!

 

3常見問題

 

4注意事項

① 酚一定要堿平衡。苯酚具有高度腐蝕性,氯仿易燃、易爆、易揮發(fā),具有神經(jīng)毒作用,操作時應(yīng)注意防護。

② 取各上清時,不應(yīng)貪多,以防非核酸類成分干擾;

③ 乙醇洗滌后要充分晾干,以免影響后續(xù)反應(yīng);

④ 各操作步驟要輕柔,避免因機械損傷,造成DNA斷裂;

⑤ 為了您的安全,實驗室請帶防護口罩和手套。

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