久久婷婷久久一区二区三区,欧美三级韩国三级日本三斤,久久精品无码一区二区无码,亚州av综合色区无码一区

歡迎來北京索萊寶科技有限公司!我們將為您提供周到的服務(wù)!
產(chǎn)品分類Product categories
首頁 > 技術(shù)文章 > 怎么使用活性氧檢測試劑盒
怎么使用活性氧檢測試劑盒
 怎么使用活性氧檢測試劑盒
  活性氧檢測試劑盒(Reactive Oxygen Species Assay Kit)是一種利用熒光探針DCFH-DA進行活性氧檢測的試劑盒。DCFHDA本身沒有熒光,可以自由穿過細(xì)胞膜,進入細(xì)胞內(nèi)后,可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細(xì)胞膜,從而使探針很容易被裝載到細(xì)胞內(nèi)。細(xì)胞內(nèi)的活性氧可以氧化無熒光的DCFH生成有熒光的DCF。檢測DCF的熒光就可以知道細(xì)胞內(nèi)活性氧的水平。 本試劑盒提供了活性氧陽性對照試劑Rosup,以便于活性氧的檢測。Rosup是一種混合物(compound mixture),濃度為50mg/ml。
  本試劑盒本底低,靈敏度高,線性范圍寬,使用方便。
  本試劑盒可以測定100-500個樣品
  使用注意事項
  1.探針裝載后,一定要洗凈殘余的未進入細(xì)胞內(nèi)的探針,否則會導(dǎo)致背景較高。  2.探針裝載完畢并洗凈殘余探針后,可以進行激發(fā)波長的掃描和發(fā)射波長的掃描,以確認(rèn)探針的裝載情況是否良好。DCF的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜請參考下頁圖譜。  3.盡量縮短探針裝載后到測定所用的時間(刺激時間除外),以減少各種可能的誤差。  4.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
  活性氧檢測試劑盒操作方法
  1. 裝載探針  對于刺激時間較短(通常為2小時以內(nèi))的細(xì)胞,先裝載探針,后用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細(xì)胞。對于細(xì)胞刺激時間較長(通常為6小時以上)的細(xì)胞,先用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細(xì)胞,后裝載探針。  原位裝載探針:本方法僅適用于貼壁培養(yǎng)細(xì)胞。按照1:1000用無血清培養(yǎng)液稀釋DCFH-DA,使終濃度為10微摩爾/升。去除細(xì)胞培養(yǎng)液,加入適當(dāng)體積稀釋好的DCFH-DA。加入的體積以能充分蓋住細(xì)胞為宜,通常對于六孔板的一個孔加入稀釋好的DCFH-DA不少于1毫升。37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育20分鐘。用無血清細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞三次,以充分去除未進入細(xì)胞內(nèi)的DCFH-DA。通常活性氧陽性對照在刺激細(xì)胞20-30分鐘后可以顯著提高活性氧水平。
  收集細(xì)胞后裝載探針:按照1:1000用無血清培養(yǎng)液稀釋DCFH-DA,使終濃度為10微摩爾/升。細(xì)胞收集后懸浮于稀釋好的DCFH-DA中,細(xì)胞濃度為一百萬二千萬/毫升,37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育20分鐘。每隔3-5分鐘顛倒混勻一下,使探針和細(xì)胞充分接觸。用無血清細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞三次,以充分去除未進入細(xì)胞內(nèi)的DCFH-DA。直接用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細(xì)胞,或把細(xì)胞等分成若干份后刺激細(xì)胞。通?;钚匝蹶栃詫φ赵诖碳ぜ?xì)胞20-30分鐘后可以顯著提高活性氧水平。 說明:僅在陽性對照孔中加入Rosup作為陽性對照,其余孔不必加入Rosup。
  2. 檢測  對于原位裝載探針的樣品可以用激光共聚焦顯微鏡直接觀察,或收集細(xì)胞后用熒光分光光度計、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀檢測。對于收集細(xì)胞后裝載探針的樣品可以用熒光分光光度計、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀檢測,用激光共聚焦顯微鏡直接觀察也可以。
  3. 參數(shù)設(shè)置  使用488nm激發(fā)波長,525nm發(fā)射波長,實時或逐時間點檢測刺激前后熒光的強弱。DCF的熒光光譜和FITC非常相似,可以用FITC的參數(shù)設(shè)置檢測DCF。
  4. 其它說明  陽性對照可以按照1:1000的比例使用。例如裝載好探針的細(xì)胞共1毫升,可以加入1微升的陽性對照刺激。通常刺激后20-30分鐘內(nèi)可以觀察到非常顯著的活性氧水平升高。對于不同的細(xì)胞,活性氧陽性對照的效果可能有較大的差別。如果在刺激后30分鐘內(nèi)觀察不到活性氧的升高,可以適當(dāng)提高活性氧陽性對照的濃度。如果活性氧升高得過快,可以適當(dāng)降低活性氧陽性對照的濃度。  另外,對于某些細(xì)胞,如果發(fā)現(xiàn)沒有刺激的陰性對照細(xì)胞熒光也比較強,可以按照1:2000-1:5000稀釋DCFH-DA,使裝載探針時DCFH-DA的濃度為2-5微摩爾/升。探針裝載的時間也可以根據(jù)情況在15-60分鐘內(nèi)適當(dāng)進行調(diào)整。
  活性氧陽性對照(Rosup)僅僅用于作為陽性對照的樣品,并不是在每個樣品中都需加入活性氧陽性對照。

版權(quán)所有  ICP備案號: 管理登陸 技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)   總流量:941586  網(wǎng)站地圖

国产成人无码免费网站| 色情推油按摩g点高潮无码视频| 少妇性饥渴姓交hdsex| 亚洲AV无码国产精品久久| 在线综合亚洲欧洲综合网站| 国产亚洲精品拍拍拍拍拍| 亚洲另类欧美综合久久图片区| 野外做受又硬又粗又大视频 | 亚洲成av人片在www色猫咪| 亚洲精品欧美综合二区| 中文在线っと好きだっ最新版| 激情都市 校园 人妻 武侠| 男人女人亲吻视频| 无码国产一区二区三区四区| 精品无码一区二区三区爱欲九九| 日本丰满岳乱妇在线观看| 精品少妇人妻AV免费久久洗澡| 久久精品AⅤ无码中文字字幕| 久久九九久精品国产免费直播| 好吊色欧美一区二区三区四区 | 妻子的秘密免费读全文 | 色噜噜av亚洲色一区二区| 少妇又紧又深又湿又爽视频| 莫妮卡欧美R级无删版影片| 国产偷窥熟女精品视频| 色欲精品国产一区二区三区| 少妇人妻av| 久久午夜无码免费| 国产精品无码mv在线观看| 中文字幕爆乳julia女教师| 亚洲AV无码成人精品区在线观看| 欧美大肥婆bbbww| 25card中国大学高清视频| 饱满的乳峰喷奶水视频| 婷婷五月六月激情综合色中文字幕 | 久久天天躁狠狠躁夜夜av| 国产曰的好深好爽免费视频| 非洲人和和人配人视频| 久久午夜无码鲁丝片| 1000部啪啪未满十八勿入免费 | 亚洲精品久久久久久|