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TriQuick總RNA提取 說明書

TriQuick總RNA提取(TriQuick Reagent)說明書
貨號: R1100
規(guī)格: 100ml
保存: 4℃避光保存,保質(zhì)期12個月。
產(chǎn)品簡介:
本試劑是一種通用的總RNA提取,適用于動植物細(xì)胞或組織及細(xì)菌的總RNA的抽提,可有效防止RNA在提取過程中的降解。獲得的RNA可直接用于Northern雜交,純化mRNA,體外翻譯,RNase保護(hù)實驗,RT-PCR以及cDNA克隆等一系列操作??捎糜?00次總RNA提取(10平方厘米細(xì)胞或100mg組織)。
操作說明: 自備新開封或氯仿,異丙醇,75%乙醇,DEPC處理水。1. 細(xì)胞裂解或組織勻漿: 1)貼壁細(xì)胞:吸盡培養(yǎng)液,每10平方厘米(6孔板孔或35 mm平皿)細(xì)胞加入1 ml TriQuick Reagent,使其覆蓋培養(yǎng)細(xì)胞,再用吸管或加樣器吹打2~3次,細(xì)胞應(yīng)*裂解,然后轉(zhuǎn)移離心管中。2)懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,吸盡液體,每五百萬一千萬(5×106-1×107)動植物或酵母細(xì)胞,或一千萬 (1×107)細(xì)菌,加入1ml TriQuick Reagent 。用吸管或加樣器吹打,使其*裂解。某些酵母和細(xì)菌如裂解不充分,可用勻漿器勻漿,以確保其*裂解。轉(zhuǎn)移離心管中。3)組織:先將組織剪切成小塊,放入玻璃勻漿器內(nèi)。冷凍組織可在研缽中研磨勻漿。每50-100mg組織加入1ml TriQuick Reagent ,勻漿*裂解。轉(zhuǎn)移離心管中。 裂解產(chǎn)物應(yīng)呈澄清的透明粘稠液體。室溫放置5分鐘。對于多糖、蛋白等雜質(zhì)豐富的組織樣品,勻漿后仍會存留有不溶物質(zhì),可12000g 4℃離心10分鐘,然后吸取上清一新的離心管中。2. 分離:在裝有裂解物的離心管中加入0.2倍體積的氯仿(1 ml TriQuick Reagent 加入0.2 ml氯仿),振蕩器上充分振蕩混勻30秒,室溫放置2-3分鐘。12000g 4℃離心10分鐘,然后吸取含總RNA的上層水相一新的離心管中,每毫升TriQuick Reagent 約可吸取0.5-0.6 ml。有機(jī)相和中間層含有DNA和蛋白質(zhì),應(yīng)避免觸及。3. 沉淀:按每毫升TriQuick Reagent 加入0.5 ml異丙醇,顛倒數(shù)次混勻,室溫沉淀10分鐘。12000g 4℃離心10分鐘,在管底可見RNA沉淀。棄上清,按每毫升TriQuick Reagent 加入1 ml 75%乙醇,輕輕顛倒混勻,以清洗RNA沉淀。12000g 4℃離心2分鐘,棄去液體,小心勿丟棄RNA沉淀。室溫倒置晾干5~10分鐘。4. 溶解:加入適量DEPC處理水使RNA沉淀溶解。存放于-80℃。

注意事項
1,RNA提取過程中所用器皿、離心管、吸頭等應(yīng)保證無污染無RNA酶。操作中應(yīng)小心,防止外源性RNA酶污染樣品導(dǎo)致RNA樣品降解。2,試劑中含有酚等有害物質(zhì),注意個人防護(hù)。
相關(guān)產(chǎn)品:
R1600 DEPC處理水
R1050 5×RNA Loading Buffer
M1010 10×MOPS 緩沖液
SR0020 RNAwait(非凍型組織RNA保存液)

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