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PAGE凝膠快速銀染試劑盒

PAGE凝膠快速銀染試劑盒

貨號: G7210
規(guī)格: 1L
保存: 室溫(15℃-25℃) 干燥保存,復(fù)檢期12個月。

試劑盒內(nèi)容: G7210
硝酸銀       2g
染色液A      100ml
顯色液B      100ml
顯色液C      100ml
終止液D      100ml

注:1L 規(guī)格指可配制的硝酸銀染色液的體積,實際使用次數(shù)根據(jù)PAGE 膠大小不同而不同。
產(chǎn)品簡介:
核酸銀染的原理是銀離子可與核酸形成穩(wěn)定的復(fù)合物,然后用還原劑如甲醛在堿性環(huán)境下使Ag+還原成銀
顆粒,可把核酸電泳帶染成黑褐色。它主要用于聚丙烯酰胺凝膠電泳染色。其靈敏度比EB 高200 倍,該產(chǎn)品
整個過程只需要20 分鐘,操作簡單,靈敏度高,能檢測到10ng 以下的DNA 條帶。

操作步驟:
一、染色液配制
需要配制的染色液體積根據(jù)PAGE 膠的大小而定,一般的mini-PAGE 膠需要20-30mL。配制用的器皿清洗
干凈后用去離子水涮洗,染色液須用去離子水配制,現(xiàn)用現(xiàn)配。如果配制的溶液體積不是100mL,可以按比例
改變各成分用量。
1,硝酸銀染液:稱取0.2g 硝酸銀,加入到90ml 去離子水中*溶解,加入10ml 溶液A 混勻,現(xiàn)用現(xiàn)配。
2,顯色液:分別取溶液B 和溶液C 各10ml 加入80ml 去離子水中混勻,現(xiàn)用現(xiàn)配。
3,終止液:取終止液D 10ml 加去離子水稀釋100ml,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二、染色:
1,PAGE 電泳結(jié)束后,將PAGE 蛋白膠轉(zhuǎn)移玻璃平皿或搪瓷盤中,用去離子水漂洗兩遍,每次2min。
2,將PAGE 膠轉(zhuǎn)移硝酸銀染液中,使染液沒過PAGE 膠,室溫染色10min??芍糜趽u床上緩慢搖晃,使
其染色均勻。
3,棄去染色液,用去離子水快速漂洗三次,每次半分鐘。
4,將PAGE 膠轉(zhuǎn)移顯色液中,使顯色液沒過PAGE 膠,室溫?fù)u晃顯色條帶清晰可見。
5,可選,將PAGE 膠轉(zhuǎn)移終止液中,終止顯色1min。
6,銀染后PAGE 膠可拍照保存或用于后續(xù)試驗。
注意事項:
1. 銀染主要出現(xiàn)在PAGE 膠的表面,使用薄膠(0.5-0.75mm)可以提高靈敏度。
2. 對于考馬斯亮藍(lán)染色的SDS-PAGE 膠,可用甲醇將膠漂洗后,繼續(xù)進(jìn)行銀染??既具^程中的乙酸會干擾銀染,因此要確保將PAGE 凝膠中殘留的乙酸*洗凈。
3. 不同蛋白質(zhì)對銀染的反應(yīng)是不一樣的,尤其是堿性蛋白染色效果差。因此,不宜用銀染測定不同蛋白
的比例。
4. 染色過程中,緩慢的振蕩是必要的,一般選擇40-60 rpm.
5. 凝膠表面的裂紋多是由于壓力、手印及表面干燥所致,所以全程中都應(yīng)帶手套操作。
6. PAGE 凝膠背景呈均一的黑色多是水中的雜質(zhì)引起的,所以溶液的配制應(yīng)使用電導(dǎo)率小于1 μS 的去離
子水。
7. 如果染色后有呈灰塵或煙霧狀灰色或棕色的沉淀出現(xiàn)在凝膠表面,可能是在幾步漂洗過程中洗得不夠
*,或是染色過程時溫度太低。
8. 較深的銀染背景多是丙烯酰胺中的雜質(zhì)所致。
9. PAGE 膠中的甘油、尿素、甘氨酸、Triton X-100 和兩性電解質(zhì)這些物質(zhì)會干擾銀染。
10. 室溫操作時,溫度的波動往往會干擾銀染的效果,恒溫水浴可以解決這個問題。
11. 憑借戊二醛預(yù)處理可以使各種蛋白質(zhì)的染色提高40 倍。
12. 染色使用的玻璃器皿必須非常干凈,用酸浸泡可以滿足要求。
13. 銀染應(yīng)盡快照相,隨著時間延長,蛋白條帶會變淺,而背景會加深。
14. 銀染容器理想的是玻璃平皿,其次是搪瓷盤和密胺塑料盤等。
相關(guān)產(chǎn)品:

P1305        考馬斯亮藍(lán)染色液
P1300-500    考馬斯亮藍(lán)蛋白膠快速染色液
P0012        10×麗春紅染色液
PR1400       低分子量蛋白MARKER
PR1700       預(yù)染次高分子量蛋白MARKER
P1200        SDS-PAGE 凝膠制備試劑盒

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