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索萊寶 凝血酶(Thrombin) 說明書

凝血酶(Thrombin)
貨號:T8021
規(guī)格:1000U
保存:2-8℃保存,有效期3年。
溶解方法:
可用生理鹽水(0.9% NaCl溶液)配制,儲存液參考濃度1000U/ml,-20℃保存可穩(wěn)定6個月。為避免反復凍融,可分裝凍存。
產(chǎn)品應用:
一、凝血實驗
凝血酶(Thrombin)來源于牛血漿,分子量37KD,是由兩條肽鏈(31KD 和6KD)通過二硫鍵組成的。
凝血酶是凝血酶原(凝血因子 Ⅱ)激活后形成的蛋白質(zhì)水解酶,其催化纖維蛋白原(fibrinogen)水解掉A 肽和B 肽,由此形成纖維蛋白單體,單體進一步聚合,在血小板、紅細胞和白細胞等參與下形成血凝塊。
凝血酶酶活:固體活力:50-200 單位/mg solid;比活力:比活力大于2000 單位/mg protein;
酶活檢測方法:以纖維蛋白原為底物,按2010 版藥典凝血酶凍干粉檢測。
產(chǎn)品穩(wěn)定性好:凍干產(chǎn)品在室溫條件下考察12 個月,酶活力未見顯著變化,冷藏條件下保存36 個月,酶活力未見顯著變化。
二、標簽切割
由于凝血酶具有切割序列專一性強,水解效率高的特點,它也被廣泛地應用于基因工程產(chǎn)品的開發(fā),其應
用之一是作為工具蛋白酶用于重組融合蛋白質(zhì)的特異性斷裂,尤其適用于生物工程制藥業(yè)及基因工程、生物化學、分子生物學等研究。
凝血酶是一種廣泛用于切割標簽的蛋白酶,凝血酶佳切割位點是X4-X3-P-R[K]-X1'-X2',這里X4 和 X3是疏水氨基酸而X1'和 X2'是非酸性氨基酸,一些經(jīng)常使用的識別位點是L-V-P-R-G-S,L-V-P-R-G-F,和M-Y-P-R-G-N。在X4-X3-P-R-G-X2'之間切割比在X4-X3-P-K-L-X2'更有效。其他識別位點是 X2-R[K]-X1', 這里X2 或者 X1'是甘氨酸,例如A-R-G 和G-K-A,這里切割發(fā)生在第二個殘基后。在凝血酶切割位點和N 末端標簽之間插入五個甘氨酸殘基可改善切,通過這一"甘氨酸連接肽"只需較少酶量就可達到*切割,而且也可以避免可能發(fā)生的錯誤切割。
作為切割標簽的蛋白酶具有以下特點:
1、純度高:SDS-PAGE 檢測圖譜無雜蛋白條帶;
2、不含有其他蛋白酶活性;
3、酶切活性高,能夠有效切質(zhì)量比為1:1000 的蛋白。切割可在20℃到37℃之間切割0.3 到16 小時。
4、有效的酶切緩沖液是20mM Tris-HCl 緩沖液,含150mM 氯化鈉,pH8.0。
5、凝血酶可從切割產(chǎn)物中用p-氨基瓊脂糖親和純化,或者苯甲脒瓊脂糖移去。
酶切條件:
凝血酶酶切條件舉例:20mM Tris-HCl緩沖液,含150mM NaCl,pH8.0體系中:
融合蛋白總量 100:g
凝血酶用量 0.2-0.3U
溫度 20℃-37℃
酶切時間 0.3h-16h
根據(jù)底物蛋白酶切位點的差異,可以適當調(diào)整凝血酶的工作濃度與酶切時間,以便達到較好的酶切效果。

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