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CA1080 支原體檢測試劑盒 solarbio

CA1080 支原體檢測試劑盒 solarbio
貨號:CA1080

保存:4℃保存,有效期為2年,Hoechst 工作液需要避光保存。
產(chǎn)品內(nèi)容:
Hoechst 33258 工作液 100mL 200mL
固定液 100mL 200mL
抗熒光衰減封片液 20mL 40mL
說明書 1 份 1 份
產(chǎn)品簡介:
本試劑盒是利用熒光染料(bisbenzimide,Hoechst 33258)檢測支原體污染,這種染料會結(jié)合到DNA 的A-T 富集區(qū)域,因為支原體的DNA 中A-T 含量高(55%~80%),所以可將其染色而被檢測到。被支原體污染的細(xì)胞經(jīng)染色后在細(xì)胞周圍可看到許多大小均一的熒光小點,即為支原體的DNA 染色斑,說明有支原體污染。Hoechst 33258 的大激發(fā)波長為346nm,大發(fā)射波長為460nm;
Hoechst 33258 和雙鏈DNA 結(jié)合后,大激發(fā)波長為352nm,大發(fā)射波長為461nm。
操作步驟:
貼壁細(xì)胞:
1. 被檢細(xì)胞接種于無菌的6 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,接種密度為1-2×104。同時,接種正常無支原體感染的同種細(xì)胞,作為陰性對照。
2. 5 天后,先吸去培養(yǎng)液,再加入1mL 的固定液,靜置20min,
3. 吸去固定液,晾干。
4. 于每孔中,加入1mL 的Hoechst33258 工作液(Hoechst 33258 工作液須覆蓋全部被檢細(xì)胞),
37℃避光放置15-20min 或室溫靜置20~30min。
5. 吸去Hoechst 33258 工作液,加入2mL 滅菌超純水洗滌三次,直接風(fēng)干。風(fēng)干后加入一滴封片
液,并以蓋玻片覆蓋。
6. 熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā),觀察細(xì)胞周圍是否有藍(lán)色熒光小點或串珠狀熒光小點。
懸浮細(xì)胞:
1. 收集需檢測的細(xì)胞,1500rpm,5min。
2. 將收集的細(xì)胞涂片于載玻片上,再加1mL 的固定液,靜置20min。
3. 吸去固定液,晾干。
4. 于每孔中,加入1mL 的Hoechst33258 工作液(Hoechst 33258 工作液須覆蓋全部被檢細(xì)胞),
37℃避光放置15~20min 或室溫靜置20~30min。

5. 吸去Hoechst 33258 工作液,用無菌水洗滌玻片3 次,直接風(fēng)干。風(fēng)干后加入一滴封固液,并以
蓋玻片覆蓋。
6. 熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā),觀察細(xì)胞周圍是否有藍(lán)色熒光小點或串珠狀熒光小點。
結(jié)果判斷(參考):
陰性:僅見細(xì)胞的細(xì)胞核呈現(xiàn)黃綠色熒光。
陽性:除細(xì)胞外,細(xì)胞周圍可見大量的大小均一的熒光著色顆粒。
注意事項:
1. Hoechst 工作液對人體有害,請注意防護(hù)。
2. 固定液有刺激性氣味,建議在通風(fēng)櫥進(jìn)行固定。
3. 支原體檢測時,好用不含抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)2~3 代,這樣容易避免假陰性結(jié)果。
4. 本試劑盒用于6 孔板檢測時,可以進(jìn)行50 次檢測反應(yīng)。
5. 檢測支原體污染,可以使用支原體Vero 細(xì)胞,這樣可以提高檢測靈敏度,即將被檢測樣品
接種于Vero 細(xì)胞進(jìn)行檢測。

相關(guān)產(chǎn)品:
P2100 10×多聚賴氨酸
S2100 抗熒光衰減封片劑
C0020 Hoechst 33258 染液(即型)

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