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如何選擇合適的重組蛋白

如何選擇合適的重組蛋白


選擇合適的重組蛋白產品,對你得到正確的實驗結果關重要,可從以下幾點進行選擇:


1、蛋白來源


對于一些蛋白,需要進行一系列的翻譯后修飾才能成為具有活性的成熟蛋白。細菌不能提供這樣的修飾,而哺乳動物細胞可以。因此,選購時應注意蛋白的來源。例如,novaprotein的人IL-4是在E. coli中制備的,金斯瑞的人IL-4是在哺乳動物CHO細胞中制備的。


當然除了上面提到的兩種表達系統(tǒng)外,還有酵母和昆蟲表達系統(tǒng),四種系統(tǒng)各有優(yōu)劣,選重組蛋白是一定要注意。


表達

細胞

優(yōu)點

缺點

原核

E.coli

繁殖快、成本低、產量高;遺傳背景及基因表達調控機制清楚;易于大規(guī)模培養(yǎng),成本低廉

蛋白常為包涵體,純化困難;無糖基化(分泌蛋白,細胞膜上蛋白不可用),生物活性不定;無翻譯后修飾,內毒素含量高

酵母

Pichia

使用簡單,表達量高,His-tag便于純化,一定的翻譯后加工可進行糖基化修飾,操作簡單,適合大規(guī)模生產;可誘導表達,也可分泌表達,產物便于純化

有時會出現蛋白切割問題;糖基化不能滿足要求

昆蟲

High-5

產量高,翻譯后加工與哺乳動物相似;對于部分有毒性或較難表達蛋白有優(yōu)勢;無內毒素污染

蛋白活性不如哺乳動物;適合表達激酶等定位于細胞內的真核蛋白

哺乳

CHO;

HEK293

完善的翻譯后加工,活性接近天然蛋白

周期長、技術要求高;表達產量低


2、種屬來源


蛋白的種屬來源常見的有人源、小鼠源和大鼠源等。一般來說,不同種屬之間的蛋白同源性在80%以上就可視為有交叉活性,可推薦使用。


3、生物活性和穩(wěn)定性


蛋白的純度、內毒素水平和批次間穩(wěn)定性等直接會影響實驗結果,因此,高品質的蛋白產品會嚴格監(jiān)控這一環(huán)節(jié),并且提供詳細數據。同時,在選擇蛋白產品時還需考慮其生物活性。


一般記得以下五點就行:

· 大多數人類細胞因子對小鼠細胞都有活性。

· 許多小鼠細胞因子對人類細胞也有活性,但比相應人類細胞因子活性低。

· 一些人類的細胞因子(如IL-7)在小鼠細胞中表現出比小鼠細胞因子更高的活性。

· 干擾素、GM-CSF、IL-3 和IL-4 有物種特異性,對于非人類細胞幾乎沒有活性。

· 成纖維細胞生長因子和神經營養(yǎng)因子是高度保守的,在其它的動物細胞中也能表現很好的活性。


4、蛋白形式


通常有兩種形式:含牛血清白蛋白BSA或不含BSA,不含BSA一般用“CF"表示。加入BSA可以提高蛋白質的穩(wěn)定性,增加了貯存期限。含BSA的蛋白可以作為細胞組織培養(yǎng)物或者ELISA實驗中的理想標準品,而CF形式的蛋白尤其適用于活體實驗。以R&D systems的Human IL?4為例,就有兩種形式,買之前要先明確自己用來做什么實驗的。


5、查閱文獻


這個是快捷的方法,怎么去查文獻是我們必須要掌握的技能。


雖有萬般方法,但是只要你會查閱文獻,則萬事皆定。


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