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多聚-L-賴氨酸(Poly-L-Lysine)的原理、應(yīng)用及配置

更新時(shí)間:2025-10-10點(diǎn)擊次數(shù):209

多聚賴氨酸一般常見(jiàn)的分子量有70,000~150,000,150,000~300,000和>300,000,分子量越大,黏附力越強(qiáng),但相對(duì)充分溶解較困難。

原理:

多聚賴氨酸溶液是廣泛應(yīng)用的組織切片與玻片黏合劑,該多聚陽(yáng)離子分子與組織切片上的陰離子相互作用會(huì)產(chǎn)生較強(qiáng)的黏合力。培養(yǎng)瓶表面的性質(zhì)對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)至關(guān)重要,細(xì)胞表面的糖蛋白(陰性)易于吸附在親水性的表面上,因而細(xì)胞培養(yǎng)表面如果有相當(dāng)含量的陽(yáng)性電荷更能促進(jìn)細(xì)胞吸附,這正是運(yùn)用多聚賴氨酸優(yōu)化細(xì)胞培養(yǎng)表面的重要所在。

應(yīng)用:

適用組織學(xué),免疫組織化學(xué),細(xì)胞涂片,冰凍切片,原位雜交等使用的玻片的防脫片處理,以防實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中組織掉片。也可用于細(xì)胞培養(yǎng),增加細(xì)胞貼壁能力。


溶液配制:

用去離子水溶解,配制成母液備用。保存于-20℃。

玻片處理:

1.滅菌水稀釋聚賴氨酸溶液,一般的使用濃度為0.01%。

2.將玻片浸在稀釋的多聚賴氨酸溶液5分鐘。注意增加時(shí)間不會(huì)提高包被效果。

3.在60℃烘箱1小時(shí)干燥,或室溫18-26℃過(guò)夜干燥待用。

注意:

1.每100mL已稀釋的多聚賴氨酸溶液要包被的玻片40-90張, 超過(guò)90張片子將影響其黏合力。

2.用之前的玻片必須保持清潔。必要時(shí)用含1% HCl的70%乙醇溶液來(lái)清洗。

3.釋過(guò)的多聚賴氨酸溶液要放在2-8℃,至少在3個(gè)月內(nèi)是穩(wěn)定的。

4.用過(guò)的稀釋液要過(guò)濾,若出現(xiàn)渾濁或長(zhǎng)菌要丟棄

5.多聚賴氨酸濃度可以高一些,吸出來(lái)的可以重復(fù)利用至少20次。

培養(yǎng)瓶處理:

1.包被培養(yǎng)板或者是培養(yǎng)瓶,一般多聚賴氨酸濃度為0.01%,

2.準(zhǔn)備100ml三蒸水,經(jīng)高壓滅菌處理。

3.0.01%的多聚賴氨酸以50微升每平方厘米的量均勻涂于培養(yǎng)底物的表面,室溫下靜置5min,吸除多余液體。

4.加入滅菌水,反復(fù)沖洗三次,無(wú)菌操作。

5.處理后無(wú)菌晾干備用。

6.回收后保持無(wú)菌的多聚賴氨酸可反復(fù)利用。



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