細(xì)胞固定液作用是殺死細(xì)胞,固定細(xì)胞形態(tài)。下面列舉幾種常用細(xì)胞固定液及優(yōu)缺點(diǎn)比較。
1. 冷丙酮 可用于一般的免疫組化染色。
將純的丙酮預(yù)先放入冰箱-20℃后便為冷丙酮(放心,丙酮在此溫度不會(huì)為固體的)細(xì)胞爬片取出后,PBS洗2遍,便可加入冷丙酮于-20℃(丙酮有很強(qiáng)的揮發(fā)性,注意將含有丙酮和爬片的器皿蓋嚴(yán),防止其揮發(fā))固定10分鐘。取出后,室溫吹干,然后放入-20℃保存。
2. 多聚甲醛(常用4%):可用于免疫電鏡;也可用于免疫熒光以及TUNEL染色。
主要檢測(cè)組織內(nèi)一些性能嬌弱的抗原特別是細(xì)胞表面抗原,例如各類淋巴細(xì)胸分化決定簇(CD)、主要組織相容性抗原等
室溫固定15分鐘后,將表面液體吹干,入-20℃保存
3. 95%乙醇,可用于免疫組化。
優(yōu)點(diǎn):穿透性強(qiáng)、抗原性保存較好。
缺點(diǎn):但醇類對(duì)低分子蛋白質(zhì)、多肽及胞漿內(nèi)蛋白質(zhì)保存效果較差,使蛋白變性的作用輕,固定后可再溶解;染色過(guò)程中,溫育時(shí)間長(zhǎng),抗原可流失而減弱反應(yīng)強(qiáng)度
室溫固定15分鐘后,將表面液體吹干,入-20℃保存
4. 甲醛(福爾馬林)應(yīng)用廣
優(yōu)點(diǎn):形態(tài)結(jié)構(gòu)保存好,且穿透性強(qiáng),
缺點(diǎn): 甲醛放置過(guò)久可氧化為甲酸,使溶液pH降低,影響染色; 分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或充分掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露。可造成假陰性的染色結(jié)果。
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