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通用細胞凍存液的操作
細胞凍存是細胞培養(yǎng)、引種、保種和保證實驗順利進行的重要技術(shù)手段。在細胞建株和建系中,及時凍存原始細胞是十分重要的。在雜交瘤單克隆抗體的制備過程中,雜交瘤細胞、每次克隆化得到的亞克隆細胞的凍存保種常常是不可少的實驗操作。因為在沒有建立一個穩(wěn)定的細胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細胞系的時候,細胞的培養(yǎng)過程中隨時可能因細胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等等導(dǎo)致實驗失敗,如果沒有原始細胞的凍存,則因為上述的意外而前功盡棄。通用細胞凍存液可用于培養(yǎng)細胞的凍存。

通用細胞凍存液的使用步驟:

1、培養(yǎng)細胞至對數(shù)生長晚期,顯微鏡觀察其外觀、形態(tài)、有無污染等,取狀態(tài)良好的細胞進行凍存操作。

2、離心,棄上清。

3、加入適量的通用細胞凍存液,重懸細胞,使細胞濃度達到1~10×106/ml,置于凍存管中,密閉、不要擰的太緊,避免彎曲變形。

4、一般遵循1℃/min的速率進行冷凍。亦可采用4℃ 20min,-20℃ 30min,-70℃過夜,然后置于液氮罐中長期存儲。

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