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新品上市—SAlexa Fluor熒光素抗體標(biāo)記試劑盒

圖片

熒光標(biāo)記所依賴的化合物稱為熒光物質(zhì)。熒光物質(zhì)是指具有共軛雙鍵化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物,當(dāng)受到某一波段光照射時(shí)激發(fā)成為激發(fā)態(tài),當(dāng)從激發(fā)態(tài)恢復(fù)基態(tài)時(shí)可發(fā)出熒光。熒光標(biāo)記技術(shù)是將熒光物質(zhì)共價(jià)結(jié)合或物理吸附在所要研究分子的某個(gè)基團(tuán)上,利用它的熒光特性來提供被研究對象的信息。熒光標(biāo)記具有的無放射物污染、操作簡便等優(yōu)點(diǎn),使其在許多研究領(lǐng)域的應(yīng)用日趨廣泛,如免疫病理、細(xì)胞化學(xué)、流式細(xì)胞學(xué)。




索萊寶SAlexa Fluor熒光素抗體標(biāo)記試劑盒中的SAlexa Fluor熒光素連接有N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)酯,NHS酯可以和伯胺反應(yīng),形成穩(wěn)定的共價(jià)酰胺鍵并釋放出NHS基團(tuán)。一般一個(gè)IgG分子結(jié)合2~8個(gè)SAlexa Fluor熒光素分子可達(dá)到良好的熒光標(biāo)記效果。


產(chǎn)品信息


試劑盒組分

組分

數(shù)量

SAlexa Fluor熒光素

1

pH調(diào)整緩沖液(0.1mL)

1

1*PBS(1mL)

2

DMSO(0.1mL)

1

純化柱

2

收集管

2


試劑盒規(guī)格

一個(gè)試劑盒可標(biāo)記100μg~2mg抗體


使用說明


01

抗體準(zhǔn)備

1

建議抗體濃度調(diào)整到1~2mg/mL。

2

使用本試劑盒標(biāo)記的抗體溶液,pH在6.5~8.5為宜,最好為PBS緩沖液。緩沖液中不應(yīng)當(dāng)含有BSA等蛋白,也不應(yīng)當(dāng)含有甘氨酸或Tris等含有游離氨基的鹽類,否則可能會影響標(biāo)記效果。


02

抗體標(biāo)記

1

取出SAlexa Fluor染料離心數(shù)秒,將管中干粉甩至管底。注:未離心前請勿開蓋,以免造成損失。

2

SAlexa Fluor管中加入40mL DMSO用漩渦混勻儀混勻10~20s,至SAlexa Fluor全部溶解,瞬離5~10s,使溶解后的SAlexa Fluor溶液離心至管底。

3

抗體中加入1/10體積的調(diào)整緩沖液。

4

將溶解后的SAlexa Fluor加入抗體中(每0.1mg抗體中加入2mLSAlexa Fluor),用移液槍反復(fù)吹打混勻或用漩渦混勻儀混勻10~20s。

5

將抗體與SAlexa Fluor混合物置水平搖床或旋轉(zhuǎn)混勻儀,在搖動狀態(tài)下室溫避光反應(yīng)1~2小時(shí)。


03

游離SAlexa Fluor染料的去除

1

將純化柱下方堵頭掰斷,1000×g離心1 min倒掉保護(hù)液,將純化柱移至新的收集管中。

2

將0.2 mL PBS加入管中,待全部滲入填料后,1000×g離心1min,重復(fù)2次。

3

將標(biāo)記反應(yīng)液加入到純化柱填料表面。如果樣品體積小于50mL,用試劑盒中的PBS補(bǔ)齊至50mL。上樣體積最大不要超過200mL。

4

待樣品滲入填料后,1000×g離心2min,收集純化的蛋白溶液。

5

將抗體標(biāo)記物4℃避光保存待用。


04

標(biāo)記抗體保存

標(biāo)記抗體可4℃避光保存,也可以根據(jù)需要選擇加入BSA、防腐劑、甘油等成分保證產(chǎn)品穩(wěn)定。

*推薦保存液:0.01M PBS(pH7.4) 含1%BSA,0.03%

Proclin300和50%甘油,可-20℃保存一年。


05

染料-蛋白質(zhì)比率的計(jì)算

1

用PBS稀釋少量標(biāo)記蛋白。

2

使用路徑長度為1cm的比色皿,在280nm處測量吸光度和特定染料的Amax(見附表)

3

計(jì)算蛋白質(zhì)濃度

C(mg/mL)={[A280-(Amax× Cf)]/1.4}×稀釋因子。

√C是染料-蛋白共軛物濃度;

√A280和Amax分別是在280nm處的吸光值以及在Amax波長處的吸光值;

√Cf是染料校正因子見附表;

√稀釋因子是在光度測量時(shí)的稀釋倍數(shù)

4

計(jì)算標(biāo)記率的方法如下

DOL=(Amax×Mwt×稀釋因子)/(ε×C)

√C是染料-蛋白共軛物濃度;

√Mwt是IgG的分子量;

√ε是染料的摩爾吸光系數(shù)見附表。


注意事項(xiàng)

1. NHS酯類染料對水分敏感,SAlexa Fluor需現(xiàn)用現(xiàn)配;

2. 低濃度的疊氮鈉(0.02%)和10%甘油不會明顯干擾蛋白質(zhì)的標(biāo)記。但含有氨基的溶液及大于10%甘油對抗體的標(biāo)記效率有較大影響。標(biāo)記前應(yīng)盡量去除干凈;

3. 試劑盒組份在運(yùn)輸過程中可能造成顛倒,會使液體或干粉試劑沾到管壁或瓶蓋上。使用前請離心處理,以使附著管壁或瓶蓋的液體或干粉試劑沉積到管底;

4. DMSO屬微毒類,對人體皮膚有滲透性,眼有刺激作用,使用時(shí)避免與皮膚,眼睛和黏膜接觸。


附表

*:以nm為單位的激發(fā)波長

ε:Amax時(shí)的摩爾消光系數(shù)(M-1 cm-1)

Cf:校正系數(shù)(A280/Amax)


相關(guān)產(chǎn)品

貨號

名稱

SALK0001

SAlexa Fluor350

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