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ELISA實驗結(jié)果計算實例


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數(shù)據(jù)讀取和處理


以夾心法為例

1

推薦使用酶標(biāo)儀進行雙波長檢測,測定450 nm和630 nm波長下的OD值,并用450 nm的OD測定值減去630 nm的OD測定值。

2

ELISA的樣本和標(biāo)準品通常要設(shè)置1~2個復(fù)孔進行檢測,分別求出標(biāo)準品、樣本吸光度的平均OD值。

3

每個標(biāo)準品和樣品的OD值應(yīng)減去空白孔的OD值。

4

以標(biāo)準品濃度為橫坐標(biāo),吸光度OD值為縱坐標(biāo),推薦使用Origin或ELISA Calc軟件繪制標(biāo)準曲線,樣品中待檢物質(zhì)的含量可通過對應(yīng)OD值由標(biāo)準曲線換算出相應(yīng)的濃度。


結(jié)果計算

若使用Origin軟件建立標(biāo)準曲線,詳細步驟如下:


第一步: 打開軟件,分別在A(X)B(Y)輸入標(biāo)準品濃度標(biāo)準品OD值。

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第二步:選擇擬合曲線類型

選中上步輸入的數(shù)值,按如下操作依次點擊選項。

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第三步:在左側(cè)選擇<Find X/Y>,右側(cè)勾選< Find X from Y>。完成上述操作后,點擊Fit按鍵,擬合曲線和相關(guān)信息將自動生成。

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第四步:查看標(biāo)準曲線信息(如參數(shù)值,R-Square等)

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第五步:根據(jù)標(biāo)準曲線計算樣本濃度

選擇第四個工作表<Fit NLF Find X from Y1>,在左側(cè)A1(Y)輸入樣本的OD值,對應(yīng)的濃度將在右列自動生成。

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注意事項

1. 如果樣本進行了稀釋,計算樣本濃度時請乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

2. 若樣本OD值高于標(biāo)準曲線上限,應(yīng)做適當(dāng)稀釋后重新檢測,計算濃度時再乘以稀釋倍數(shù)。


若使用ELISA Calc軟件建立標(biāo)準曲線,詳細步驟如下:


第一步:將標(biāo)準曲線數(shù)據(jù)在Excel表格中整理成兩列,第一列是濃度,第二列是平均OD值。

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第二步:打開ELISA Calc軟件,復(fù)制Excel中數(shù)值部分,點軟件的<粘貼>;選擇<回歸/擬合模型>,一般優(yōu)先選擇Logistic曲線擬合(四參數(shù))、直線回歸或二次曲線回歸;點擊<回歸/擬合>。

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第三步:點<由Y計算X值>,將樣本OD值在Excel中整理成一列,右鍵選復(fù)制,然后點軟件的<粘貼>,點軟件的<復(fù)制>,即可將計算的結(jié)果到Excel中粘貼。

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注意事項

1. 如果樣本進行了稀釋,計算樣本濃度時請乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

2. 若樣本OD值高于標(biāo)準曲線上限,應(yīng)做適當(dāng)稀釋后重新檢測,計算濃度時再乘以稀釋倍數(shù)。




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