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ELISA實(shí)驗(yàn)樣本的選擇—血清&血漿

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很多小伙伴在準(zhǔn)備采血做ELISA的時(shí)候都會(huì)有這樣的疑問—我檢測的指標(biāo)是用血清,還是血漿好?今天小編就來帶大家了解一下ELISA檢測使用血清和血漿的差異。


血清和血漿的區(qū)別


人的血液由血漿和血細(xì)胞組成。血漿的成分主要包含水、蛋白質(zhì)、葡萄糖、無機(jī)鹽。血細(xì)胞包含紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板。

1

血液中如果加入抗凝劑,所獲得的不含血細(xì)胞成分的液體,即血漿。血漿中不含一些凝血過程中血小板釋放的物質(zhì)。

2

若血液中不加抗凝劑,則血小板釋放的凝血物質(zhì)會(huì)和血漿中的凝血素以及纖維蛋白原結(jié)合形成纖維蛋白,纖維蛋白很快地凝固形成凝血kuai,經(jīng)血凝塊聚縮釋出的液體,即血清。血清中不含纖維蛋白原和某些凝血因子、無參與凝血的血漿蛋白。

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在檢測中樣本的選擇


1、全血多用于血細(xì)胞、血常規(guī)、血沉等方面的檢測;

2、血清多用于血液生化、免疫等方面的檢測;

3、血漿多用于凝血等方面的檢測;

4、血清的凝血過程可能會(huì)與藥物產(chǎn)生吸附作用,從而減少血清的含量,造成實(shí)驗(yàn)中的誤差;

5、血漿中含有抗凝物質(zhì)(EDTA或肝素),可能干擾化合物的結(jié)合或檢測,如果要收集血漿,抗凝劑的種類應(yīng)根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行選擇。


血清&血漿樣本的制備方法


血清樣本的制備

1

使用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液樣本,將試管或離心管在室溫下放置1小時(shí)或2~8℃過夜,分離出血清;

2

2~8℃條件下,以1000×g離心20分鐘,小心收集上清液(血清)。


血漿樣本的制備

1

使用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液樣本;

2

采集后30分鐘內(nèi),2-8℃條件下,以1000×g離心15分鐘,小心收集上清液(血漿);

3

常見的抗凝劑包括:EDTA鈉鹽,肝素鈉,枸櫞酸鈉等,ELISA實(shí)驗(yàn)中,通常推薦EDTA鹽(EDTA二鈉鹽或EDTA二鉀鹽)作為抗凝劑。

檢測前請仔細(xì)閱讀ELISA試劑盒說明書,查看該試劑盒針對抗凝劑是否有特殊要求。


注意事項(xiàng)

在收集血液樣本的過程中應(yīng)避免溶血,因?yàn)榧t細(xì)胞在溶解時(shí)會(huì)釋放具有過氧化物酶活性的物質(zhì),這種情況下,ELISA實(shí)驗(yàn)中將會(huì)出現(xiàn)非特異性顯色反應(yīng),導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。另外,樣本還應(yīng)避免細(xì)菌污染,因?yàn)榧?xì)菌可能含有內(nèi)源性HRP,也會(huì)導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。


所有血清、血漿樣本收集完成后,應(yīng)及時(shí)分裝放在-20℃或-70℃條件下保存,避免反復(fù)凍融。如果在24小時(shí)內(nèi)檢測,樣本可以存放在2~8℃。在分析前,冷凍樣本應(yīng)該緩慢的恢復(fù)至室溫,輕柔地混勻。如果保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。

以上就是小編分享給大家關(guān)于ELISA檢測是用血清樣本還是血漿樣本的實(shí)驗(yàn)干貨,祝各位小伙伴實(shí)驗(yàn)順利!


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