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胰蛋白酶測(cè)定試劑盒的使用介紹
  胰蛋白酶選擇性水解變性蛋白質(zhì)中由賴(lài)氨酸或精氨酸的羧基所構(gòu)成的肽鏈,是一種重要的消 化酶。 胰蛋白酶催化水解 BAEE 的酯鍵,生成 BA,BA 在 253nm 處有吸收峰,通過(guò)測(cè)定 253nm 吸光度增加速率,即可計(jì)算出胰蛋白酶的活性。
 
  胰蛋白酶測(cè)定試劑盒的測(cè)定步驟:
 
  1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到555 nm,蒸餾水調(diào)零。
 
  2. 工作液的配制:臨用前根據(jù)用量按照試劑一(V):試劑二(V):蒸餾水(V):試劑三(V)=1 mL:1 mL:5.4 mL:0.4 mL的比例充分混合。(注意:現(xiàn)用現(xiàn)配,用多少配多少,在空瓶中配制,試劑盒中帶有4個(gè)空瓶)
 
  3. 吸取25μL樣本,加入975 μL工作液,混勻后立即測(cè)定,記錄555nm下1min時(shí)的吸光值A(chǔ)1和2min時(shí)的吸光值A(chǔ)2。計(jì)算△A=A1-A2
 
  注 意:
 
  1、如果△A小于0.005,可將反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)到5min。如果△A大于0.5,體系迅速變色,可將樣本用提取液稀釋后測(cè)定(建議稀釋10倍),計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
 
  2、要在實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都恢復(fù)到室溫,以使結(jié)果更穩(wěn)定。

  3、實(shí)驗(yàn)時(shí)要使底物避光保存。

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