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ELISA試劑盒回收率是反應(yīng)待測物在樣品分析過程中的損失的程度

更新時間:2021-08-25點擊次數(shù):769
  ELISA試劑盒回收率是什么意思?
 
  回收率是反應(yīng)待測物在樣品分析過程中的損失的程度,損失越少,回收率越高,如果作標液1PPM,就是1毫克/升,而作出標準數(shù)據(jù)為0.99毫克/升,就是說你的回收率是99%,這個與真實成分有密切的關(guān)系,說明方法的準確度。比如水中總無機氯含量測定, 樣品水中含有無機氯 20 mg/L, 取 100mL 被測水樣品, 加入 0.1mL 濃度為 10mg/mL 的含無機氯標準樣品, 測定時忽略體積變化, 如果測定出樣品中無機氯為 2.98mg/L, 則認為回收率為 98%。對于定量檢測來說,主要還是一個準確度的驗證。
 
  相對回收率可能會高于滿百的,如果只是說“損失程度”,其實是不準確的。應(yīng)該說,回收率越接近滿百,說明這個試劑盒的準確度越高。
 
  elisa試劑盒步驟如下:
 
  1.首先用包被緩沖液將已知抗原稀釋到1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜;
 
  2.第二日日洗滌3次;
 
  3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌;
 
  4.(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml;
 
  5.37℃孵育30-60分鐘,洗滌; 最后一遍用DDW洗滌。
 
  6.加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
 
  7.終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
 
  8.結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
 
  操作以上步驟完畢后,就可以知道結(jié)果了。

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