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纖維素酶測(cè)定試劑盒的操作步驟
   纖維素酶(β-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶)是降解纖維素生成葡萄糖的一組酶的總稱(chēng),它不是單體酶,而是起協(xié)同作用的多組分酶系,是一種復(fù)合酶,主要由外切β-葡聚糖酶、內(nèi)切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等組成,還有很高活力的木聚糖酶。作用于纖維素以及從纖維素衍生出來(lái)的產(chǎn)物。微生物纖維素酶在轉(zhuǎn)化不溶性纖維素成葡萄糖以及在果蔬汁中破壞細(xì)胞壁從而提高果汁得率等方面具有非常重要的意義。存在于細(xì)菌、真菌和動(dòng)物體內(nèi),能夠催化纖維素降解,是一類(lèi)可廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、棉紡、環(huán)保及可再生資源利用等領(lǐng)域的酶制劑。纖維素酶測(cè)定試劑盒的操作步驟:

  1、樣品的準(zhǔn)備

  (1)細(xì)菌或細(xì)胞:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲冰浴破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率 20%,超聲 3S 秒,間隔 10S,重復(fù) 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

  (2)組織:稱(chēng)取約 0.1g 組織加入 1mL 提取液,冰浴中勻漿。8000g ,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

  2、加樣表和測(cè)定步驟:

  試劑名稱(chēng)(μL) 對(duì)照管 測(cè)定管 標(biāo)準(zhǔn)管試劑一 50 50 - 試劑二 200 200 - 雙蒸水 50 50 - 樣本 50 - 煮沸的樣本 50 - 混勻,40℃準(zhǔn)確水浴 30min,取出后立即放入沸水中煮沸 15min,得糖化液 混勻,540nm 處蒸餾水調(diào)零,測(cè)定吸光值 A,樣品管計(jì)算ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立:540nm 處蒸餾水調(diào)零,讀標(biāo)準(zhǔn)管吸光值 A。以濃度(y)為縱坐標(biāo),吸光度 A(x)為橫坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

 

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