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談?wù)凟LISA檢測的影響因素之一樣本的影響
  ELISA即酶聯(lián)免疫吸附法,是一種常用的固相酶免疫測定方法。 由于ELISA方法簡單,方便,靈敏,特異性強(qiáng)且不需要特殊設(shè)備(只需要酶標(biāo)儀就可以),所以被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。
 
  但是影響ELISA測定的因素有很多,而其操作中需要有一定的技術(shù)要求,如操作手法,環(huán)境,樣本等,有時(shí)常可見到一些錯(cuò)誤結(jié)果(即假陽性或假陰性)等,小編為大家解讀ELISA檢測的影響因素之一樣本的影響
 
  樣本的影響有哪些?
 
  1、樣本的保存:在冰箱中保存過久的標(biāo)本,在間接法ELISA測定中會(huì)導(dǎo)致本底過深、會(huì)造成假陽性;為避免上述問題,在ELISA試劑盒測定血清標(biāo)本時(shí)最好能新鮮采集;如果不能立即測定,根據(jù)相應(yīng)的時(shí)間保存相應(yīng)的溫度,5 d內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4℃,1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)-20℃低溫凍存;如凍存后融解的標(biāo)本,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混合后再測定,但混勻時(shí)應(yīng)輕柔,不可強(qiáng)烈振蕩。
 
  2、樣本的時(shí)間:因?yàn)樗芰显嚬苣芪娇乖镔|(zhì),所以樣本長時(shí)間放在塑料管內(nèi)會(huì)使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。方法是使用真空采血管;并使用非抗凝標(biāo)本,肝素抗凝血漿會(huì)增加OD值,EDTA、酶抑制劑(如NaN3)可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性。
 
  3、樣本受細(xì)菌污染:因菌體中可能會(huì)含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶,因此,被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣,可能會(huì)產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。
 
  4、樣本的凝固:樣本凝固不全。在實(shí)驗(yàn)中,有的時(shí)候心急為了爭取時(shí)間快速檢測,ELISA試劑盒在血液還未開始凝固的時(shí)候就強(qiáng)行離心分離血清,導(dǎo)致血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結(jié)果;因此血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。
 
  5、樣本溶血:溶血標(biāo)本及混有紅細(xì)胞的血清采用ELISA法檢測易產(chǎn)生假陽性。可能是溶血血清中含有過氧化酶物質(zhì)(紅細(xì)胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素),ELISA試劑盒在洗滌過程中往往難以*洗脫,它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧(O),從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì),即顯藍(lán)色,產(chǎn)生假陽性[2]。所以嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。

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