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免疫組化常見(jiàn)問(wèn)題(精選)

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固定液如何選擇?

固定液一般建議選擇4%的多聚甲醛或者10%的中性福爾馬林。但對(duì)于有些特殊組織比如眼球、脂肪等,有些公司有專門固定液,需要提前詢問(wèn)是否影響抗原。


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選擇哪種抗原修復(fù)方法?

常用的修復(fù)方式為熱修復(fù)和胰蛋白酶消化修復(fù),應(yīng)用熱修復(fù)時(shí)應(yīng)注意所用的緩沖溶液的pH值,常用pH值為檸檬酸鹽(pH 6.0)和EDTA(pH 9.0)。

在蛋白酶消化抗原修復(fù)中,按照我們的經(jīng)驗(yàn),蛋白酶K效果好。

另外,抗原修復(fù)之前建議做一張HE染色,以檢測(cè)抗原(組織)結(jié)構(gòu)是否清晰、完整;有無(wú)人為損傷;脫蠟是否*等。具體選擇哪種抗原修復(fù)方法,請(qǐng)參考一抗說(shuō)明書(shū)。


一抗孵育條件如何選擇?

選擇4度過(guò)夜還是選擇37度一小時(shí)?建議根據(jù)抗體說(shuō)明書(shū)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。如果說(shuō)明書(shū)中未提及,建議選擇4度過(guò)夜方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。


蠟塊及白片應(yīng)該如何儲(chǔ)存?

蠟塊可存放于室溫,如果條件允許也可存放于4度,注意防潮。白片的儲(chǔ)存對(duì)染色的影響目前尚不明確,因此好的做法是在使用前新鮮制備玻片。如果白片必須存放,建議在4度進(jìn)行保存;不建議在存放前烘烤白片。


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案例展示

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測(cè)

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