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這些細(xì)胞培養(yǎng)好習(xí)慣和減少污染小細(xì)節(jié),你做到了嗎?

保證細(xì)胞間的環(huán)境無菌與穩(wěn)定

01

首先保證工作環(huán)境干凈整潔,細(xì)胞間每周定期進(jìn)行紫外殺菌,每次30分鐘。細(xì)胞間內(nèi)保持穩(wěn)定的溫度、濕度及換氣。

02

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中涉及的儀器,如:離心機(jī)、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀、倒置顯微鏡、冰箱等盡量放到細(xì)胞間使用,這樣可以保證和環(huán)境一起殺菌,保證儀器干凈整潔,不做其他實(shí)驗(yàn)使用。

03

將要使用的耗材提前放到細(xì)胞間內(nèi),減少無關(guān)物品進(jìn)入細(xì)胞間。在實(shí)驗(yàn)過程中減少細(xì)胞間門的開關(guān)次數(shù),保證環(huán)境無菌。

 

細(xì)胞培養(yǎng)前人和物的無菌準(zhǔn)備

01

準(zhǔn)備好純水要高壓滅菌后放到生物安全柜中,用來配制藥品試劑等。

02

抗生素提前配好,用過濾器過濾后分裝,放到-20℃冰箱中保存?zhèn)溆?。也可以直接用帶有抗生素的培養(yǎng)基。

03

需要用的血清、胰酶要提前放到4℃冰箱中解凍。血清一般會放到-80℃保存,要逐步解凍,直接放到37℃解凍會出現(xiàn)絮狀物會影響后期使用。

04

操作前要把培養(yǎng)基、胰酶放到37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中復(fù)溫,減少低溫對細(xì)胞的刺激。

05

將本次實(shí)驗(yàn)需要使用的物品移液器、槍頭、移液管等提前放到生物安全柜中,打開紫外燈滅菌20-30分鐘。

06

進(jìn)入細(xì)胞間前要按順序進(jìn)行自身防護(hù),在緩沖間換好、戴好:拖鞋、帽子、口鼻防護(hù)罩、白大衣、手套。拖鞋和白大衣要是細(xì)胞間專用。

 

細(xì)胞培養(yǎng)無菌操作的小細(xì)節(jié)

01

在操作前,先用酒精給手套消毒;打開生物安全柜,將工作臺用酒精棉球擦拭一遍,等酒精揮發(fā)后,進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)操作。

02

拿入到安全柜里面的物品都要用酒精噴灑消毒。

03

培養(yǎng)基、血清、胰酶等大包裝的試劑一定要進(jìn)行分裝到50mL、15mL離心管中使用,避免污染。如果不小心污染也不會浪費(fèi)大部分試劑。

04

觀察培養(yǎng)箱中的細(xì)胞,用顯微鏡觀察細(xì)胞生長密度、生長狀態(tài),是否染菌。培養(yǎng)基的消耗情況,如出現(xiàn)培養(yǎng)基變黃表示細(xì)胞需要換液,培養(yǎng)基營養(yǎng)耗盡。

05

凡是在安全柜中打開的瓶子,用完要及時(shí)蓋好,避免污染。在瓶蓋打開過程中,盡量不要從其上方經(jīng)過,避免細(xì)菌掉入。

06

做完實(shí)驗(yàn)收拾工作臺,清理垃圾,物品歸位。用酒精擦拭工作臺,打開紫外燈照射20-30分鐘。

 

相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品貨號

RPMI Medium 1640(含雙抗)

31800

MEM NEAA

41500

DMEM(低糖,含雙抗)

31600

DMEM無糖培養(yǎng)基

90113

胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) 

不含酚紅

T1300

胰蛋白酶消化液(0.25%)

 不含EDTA和酚紅

T1350

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