久久婷婷久久一区二区三区,欧美三级韩国三级日本三斤,久久精品无码一区二区无码,亚州av综合色区无码一区

歡迎來北京索萊寶科技有限公司!我們將為您提供周到的服務!
產品分類Product categories
首頁 > 技術文章 > 淺析ELISA試劑盒在實驗過程中顯色和比色的問題
淺析ELISA試劑盒在實驗過程中顯色和比色的問題
  顯色和比色在ELISA試劑盒實驗中有哪些影響?
 
  ELISA試劑盒有著準確性高、靈敏度高、特異性強等很多的優(yōu)點,它在檢測抗體、抗原等方面有很好的應用,深受廣大用戶朋友的喜愛。然而,在實驗過程中,也需要注意很多問題,特別是顯色、比色問題。
 
  ELISA知識要點顯色和比色分析 :
 
  顯色
 
  顯色是ELISA中的最后一步溫育反應,此時酶催化無色的底物生成有色的產物。反應的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內,陰性孔可保持無色,而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當提高溫度有助于加速顯色進行。在定量測定中,加入底物后的反應溫度和時間應按規(guī)定力求準確。定性測定的顯色可在室溫進行,時間一般不需要嚴格控制,有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色qing況適當縮短或延長反應時間,及時判斷。
 
  OPD(鄰ben二胺)底物顯色一般在室外溫或37℃反應20-30分鐘后即不再加深,再延長反應時間,可使本底值增高。OPD底物液受光照會自行變色,顯色反應應避光進行,ELISA試劑盒顯色反應結束時加入終止液終止反應。OPD產物用硫酸終止后,顯色由橙黃色轉向棕黃色。
 
  TMB(四甲基聯(lián)ben胺)受光照的影響不大,可在室溫中置于操作臺上,邊反應觀察結果。但為保證實驗結果的穩(wěn)定性,宜在規(guī)定的適當時間閱讀結果。TMB經HRP作用后,約40分鐘顯色達d峰,隨即逐漸減弱,至2小時后即可*消退至無色。TMB的終止液有多種,疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反應終止。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間(12-24小時)不褪,是目視判斷的良好終止劑。此外,各類酸性終止液則會使藍色轉變成黃色,此時可用特定的波長(450nm)測讀吸光值。
 
  比色
 
  比色前應先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體,然后將板正確放入酶標比色儀的比色架中。以軟板為載體的試驗,需先將板置于標準96孔的座架中,才可進行比色。*在加底物液顯色前,先將軟板邊緣剪凈,這樣,此板就可*平妥坐入座架中。
 
  比色時應先以蒸餾水校零點,測讀底物孔(未經任何反應僅加底物液的孔)和空白孔(以生理鹽水或稀釋液代替標本作全過程的孔),以記錄本次試驗的試劑狀況。其后可用空白孔以蒸餾水校零點,以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度,然后進行計算。
 
  比色結果的表達以往通用光密度(oplical density,OD),現(xiàn)按規(guī)定用吸光度(absorbence,A),兩者含義相同。通常的表示方法是,將吸收波長寫于A字母的右下角,如OPD的吸收波長為492nm,表示方法為“A492nm"或“OD492nm"。
 
  酶標比色儀
 
  酶標比色儀簡稱酶標儀,通常指于測讀ELISA結果吸光度的光度計。針對固相載體形式的不同,各有特制的適用于板、珠和小試管的設計。許多試劑公司配套供應酶標儀。酶標儀的主要性能指標有:測讀速度、讀數(shù)的準確性、重復性、度和可測范圍、線性等等。優(yōu)良的酶標儀的讀數(shù)一般可到0.001,準確性為±1%,重復性達0.5%。舉例說,若某孔測得的A值為1.083,則該孔相對于空氣的真實A值應為1.083± 0.01(1.073~1.093),重復測定數(shù)次,其A值均應1.083±0.05(1.078~1.088)在之間。酶標儀的可測范圍視各酶標儀的性能而不同。普通的酶標儀在0.000~2.000,新型號的酶標儀上限拓寬達2.900,甚至更高。超出可測上限的A值常以“*"或“over"或其它符號表示。應注意可測范圍與線性范圍的不同,線性范圍常小于可測范圍,比如某一酶標儀的可測范圍為0.000~2.900,而其線性范圍僅0.000~2.000,這在定量ELISA中制作標準曲線時應予注意。
 
  酶標儀不應安置在陽光或強光照射下,操作時室溫宜在15-30℃,使用前先預熱儀器15-30分鐘,測讀結果更穩(wěn)定。
 
  測讀A值時,要選用產物的敏感吸收峰,如OPD用492nm波長。ELISA試劑盒有的酶標儀可用雙波長式測讀,即每孔先后測讀兩次,d一次在最適波長(W1),第二次在不敏感波長(W2),兩次測定間不移動ELISA板的位置。例如OPD用492nm為W1,630nm為W2,最終測得的A值為兩者之差(W1-W2)。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

版權所有  ICP備案號: 管理登陸 技術支持:化工儀器網(wǎng)   總流量:941586  網(wǎng)站地圖

精品国产偷窥一区二区| 国产一区二区波多野结衣| 欧美肉大捧一进一出免费视频| 成人国产经典视频在线观看 | 激情综合亚洲色婷婷五月app| 国外精品视频在线观看免费 | 后入内射无码人妻一区 | 真实的和子乱拍在线观看| 免费无码又爽又高潮视频| 女朋友的妺妺5在线观看| 国产va免费精品观看| 无人区在线观看免费观看| 九九无码人妻一区二区三区| 亚洲精品无码久久久影院相关影片| 爆乳邻居肉欲中文字幕| 最新毛片婷婷99精品视频| 精品国精品无码自拍自在线| 香港特级三a毛片免费观看| 亚洲色大成网站WWW| 亚洲熟妇丰满XXXXX| 日本熟妇乱妇熟色a片蜜桃 | 久久精品国产男包| 亚洲AV无码国产精品色软件| 97久久久久人妻精品专区| 2012电影免费完整版在线看| 国产精品久久高潮呻吟无码| 免费a级毛片无码免费视频120软件| 大学生高潮无套内谢视频| 免费无码国产欧美久久18 | 国产精品宅男擼66m3u8| 中文无码精品A∨在线观看不卡 | 精品久久久久中文字幕一区| 亚洲一区二区av在线观看| 一本大道东京热无码视频| 二人扑克剧烈运动视频| 无码人妻丰满熟妇区毛片| 在线播放亚洲第一字幕| 无码精品人妻一区二区三区影院| 午夜福利在线观看| 久久午夜羞羞影院免费观看| 丁香花在线视频观看免费|