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想要做好CCK-8實(shí)驗,這幾點(diǎn)可要牢記
  CCK-8實(shí)驗可檢測細(xì)胞活力、增殖、細(xì)胞毒性等,廣泛應(yīng)用于藥物篩選等臨床前實(shí)驗研究。
 
  1. 細(xì)胞鋪板
 
  將檢測細(xì)胞對象按照合適的細(xì)胞濃度接種到96孔板,一般來說,每個孔這種3000-5000個細(xì)胞就可以了。當(dāng)然如果是檢測細(xì)胞增殖的話,可以降低細(xì)胞濃度,細(xì)胞過密會抑制細(xì)胞增殖。尤其對于貼壁細(xì)胞,細(xì)胞過密會出現(xiàn)細(xì)胞脫板現(xiàn)象,嚴(yán)重影響實(shí)驗結(jié)果?;旧?6孔板的邊緣不接種細(xì)胞,但加入培養(yǎng)基或PBS以排除邊緣效應(yīng)。每個組做3個復(fù)孔。
 
  2. 加藥刺激
 
  細(xì)胞鋪板后,按照實(shí)驗設(shè)計的時間點(diǎn)加入藥物刺激。藥物一般需要等比或者對倍稀釋,這里就不詳細(xì)贅述了。在加藥物前細(xì)胞清洗2遍,這里要強(qiáng)調(diào)一點(diǎn)就是細(xì)胞拍板的時候力度要掌握好,輕了培養(yǎng)液拍不干凈,重了會使細(xì)胞脫落。加藥時*是用排槍加,此時不要讓培養(yǎng)基中產(chǎn)生氣泡。
 
  3. 加CCK-8孵育,上機(jī)檢測
 
  每孔加入10微升CCK8溶液,同時避免產(chǎn)生氣泡。也可根據(jù)實(shí)驗需要調(diào)整加入CCK8的量,但是組間要統(tǒng)一。加入CCK8后,避光孵育1-4小時后,酶標(biāo)儀檢測OD450 nm處吸光值。
 
  整個過程看似簡單,但有幾個地方要特別注意,包括細(xì)胞接板的密度、洗細(xì)胞時不要將細(xì)胞拍脫落、加藥和CCK8溶液時不要產(chǎn)生氣泡。注意這幾點(diǎn),基本上CCK8實(shí)驗就能做出重復(fù)性較好的結(jié)果了。
 
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