CCK-8實(shí)驗(yàn)可檢測(cè)細(xì)胞活力、增殖、細(xì)胞毒性等，廣泛應(yīng)用于藥物篩選等臨床前實(shí)驗(yàn)研究。
1. 細(xì)胞鋪板
將檢測(cè)細(xì)胞對(duì)象按照合適的細(xì)胞濃度接種到96孔板，一般來(lái)說(shuō)，每個(gè)孔這種3000-5000個(gè)細(xì)胞就可以了。當(dāng)然如果是檢測(cè)細(xì)胞增殖的話(huà)，可以降低細(xì)胞濃度，細(xì)胞過(guò)密會(huì)抑制細(xì)胞增殖。尤其對(duì)于貼壁細(xì)胞，細(xì)胞過(guò)密會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞脫板現(xiàn)象，嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。基本上96孔板的邊緣不接種細(xì)胞，但加入培養(yǎng)基或PBS以排除邊緣效應(yīng)。每個(gè)組做3個(gè)復(fù)孔。
2. 加藥刺激
細(xì)胞鋪板后，按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的時(shí)間點(diǎn)加入藥物刺激。藥物一般需要等比或者對(duì)倍稀釋?zhuān)@里就不詳細(xì)贅述了。在加藥物前細(xì)胞清洗2遍，這里要強(qiáng)調(diào)一點(diǎn)就是細(xì)胞拍板的時(shí)候力度要掌握好，輕了培養(yǎng)液拍不干凈，重了會(huì)使細(xì)胞脫落。加藥時(shí)*是用排槍加，此時(shí)不要讓培養(yǎng)基中產(chǎn)生氣泡。
3. 加CCK-8孵育，上機(jī)檢測(cè)
每孔加入10微升CCK8溶液，同時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要調(diào)整加入CCK8的量，但是組間要統(tǒng)一。加入CCK8后，避光孵育1-4小時(shí)后，酶標(biāo)儀檢測(cè)OD450 nm處吸光值。
整個(gè)過(guò)程看似簡(jiǎn)單，但有幾個(gè)地方要特別注意，包括細(xì)胞接板的密度、洗細(xì)胞時(shí)不要將細(xì)胞拍脫落、加藥和CCK8溶液時(shí)不要產(chǎn)生氣泡。注意這幾點(diǎn)，基本上CCK8實(shí)驗(yàn)就能做出重復(fù)性較好的結(jié)果了。
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