想要做好CCK-8實驗，這幾點可要牢記

更新時間：2021-01-21

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　　CCK-8實驗可檢測細胞活力、增殖、細胞毒性等，廣泛應用于藥物篩選等臨床前實驗研究。

　　1. 細胞鋪板

　　將檢測細胞對象按照合適的細胞濃度接種到96孔板，一般來說，每個孔這種3000-5000個細胞就可以了。當然如果是檢測細胞增殖的話，可以降低細胞濃度，細胞過密會抑制細胞增殖。尤其對于貼壁細胞，細胞過密會出現(xiàn)細胞脫板現(xiàn)象，嚴重影響實驗結果。基本上96孔板的邊緣不接種細胞，但加入培養(yǎng)基或PBS以排除邊緣效應。每個組做3個復孔。

　　2. 加藥刺激

　　細胞鋪板后，按照實驗設計的時間點加入藥物刺激。藥物一般需要等比或者對倍稀釋，這里就不詳細贅述了。在加藥物前細胞清洗2遍，這里要強調一點就是細胞拍板的時候力度要掌握好，輕了培養(yǎng)液拍不干凈，重了會使細胞脫落。加藥時*是用排槍加，此時不要讓培養(yǎng)基中產(chǎn)生氣泡。

　　3. 加CCK-8孵育，上機檢測

　　每孔加入10微升CCK8溶液，同時避免產(chǎn)生氣泡。也可根據(jù)實驗需要調整加入CCK8的量，但是組間要統(tǒng)一。加入CCK8后，避光孵育1-4小時后，酶標儀檢測OD450 nm處吸光值。

　　整個過程看似簡單，但有幾個地方要特別注意，包括細胞接板的密度、洗細胞時不要將細胞拍脫落、加藥和CCK8溶液時不要產(chǎn)生氣泡。注意這幾點，基本上CCK8實驗就能做出重復性較好的結果了。

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想要做好CCK-8實驗，這幾點可要牢記