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ELISA試劑盒在試驗(yàn)過(guò)程中需要注意什么
  ELISA試劑盒是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的試驗(yàn)確診方法。盡管ELISA試劑盒的操作過(guò)程看似簡(jiǎn)單,但沒(méi)做到位的話就會(huì)影響試驗(yàn)的作用。所以在試驗(yàn)過(guò)程中這幾點(diǎn)非常重要:
 
  1、重要的洗刷:
 
  不充分的洗刷會(huì)導(dǎo)致差異和高布景,從而帶來(lái)不抱負(fù)的試驗(yàn)結(jié)果。假如未結(jié)合的材料殘留在微孔板中,那么它會(huì)添加布景噪音。有必要的話,可添加洗刷液中的鹽濃度,這會(huì)阻止非特異結(jié)合反響。假如布景過(guò)高,置疑洗刷不行時(shí),能夠測(cè)驗(yàn)添加洗刷次數(shù)。
 
  2、關(guān)鍵的關(guān)閉:
 
  關(guān)閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn)。這就降低了可產(chǎn)生信號(hào)的抗體非特異結(jié)合的時(shí)機(jī)。假如布景過(guò)高,置疑關(guān)閉不充分,那么能夠測(cè)驗(yàn)運(yùn)用更高濃度的關(guān)閉液,或適當(dāng)延伸關(guān)閉時(shí)間。
 
  現(xiàn)在主要有兩種類型的關(guān)閉液:蛋白和非離子型去污劑。ELISA試劑盒運(yùn)用的類型須取決于多個(gè)因素,包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、抗體和檢測(cè)試劑。好的關(guān)閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合,但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測(cè)試劑發(fā)生相互作用。
 
  3、抗體濃度須優(yōu)化:
 
  假如試劑稍有不同,則或許需求優(yōu)化抗體的量。非特異的抗體結(jié)合會(huì)添加布景。為了防止這一點(diǎn),切勿運(yùn)用過(guò)多的一抗或二抗。
 
  4、檢測(cè)試劑要適量:
 
  切勿運(yùn)用過(guò)多的檢測(cè)試劑。假如濃度過(guò)高,ELISA試劑盒或許未正確稀釋,則會(huì)導(dǎo)致高布景。也不要顯色過(guò)度,如有必要,優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)加入終止液。
 
  只要確保每一步操作都做到位,才會(huì)出現(xiàn)的試驗(yàn)結(jié)果。所以ELISA試驗(yàn)的每一步都很重要,不能夠漫不經(jīng)心。

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